凝膠電泳測定條帶的儀器是什麼

『壹』 請問做瓊脂糖凝膠電泳用什麼儀器

Wealtec的GES或mini GES電泳槽，還需要交流轉直流的供電裝置-電泳儀（ELITE300/ELITE300 PLUS）

『貳』 瓊脂糖凝膠電泳marker的作用

瓊脂糖凝膠電泳marker的作用是分子標記。

DNA分子標記具有的優越性有：大多數分子標記為共顯性，對隱性性狀的選擇十分便利；基因組變異極其豐富，分子標記的數量幾乎是無限的；在生物發育的不同階段，不同組織的DNA都可用於標記分析；分子標記揭示來自DNA的變異；

表現為中性，不影響目標性狀的表達，與不良性狀無連鎖；檢測手段簡單、迅速。隨著分子生物學技術的發展，DNA分子標記技術已有數十種，廣泛應用於遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關系鑒別、基因庫構建、基因克隆等方面。

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標記（Marker），染色體上一個可以被識別的區域（比如限制性內切酶的酶切點，基因的位置等）。標記的遺傳能夠被檢測出來。標記可以是染色體上有表達功能的部分（比如基因），也可以是沒有編碼蛋白質功能但遺傳特性能夠被檢測出來的部分。

蛋白marker可分為：

未預染的Marker即寬分子量蛋白標准、高分子量蛋白標准以及低分子量蛋白標准；

預染的Marker即單色預染和多色預染。

在westernBlot過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣雖然是個小細節，然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。

這個Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標准量精確無誤，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標准還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。

『叄』 如何用瓊脂糖凝膠電泳測定DNA片段大小其根據是什麼

步驟:
1.
制備1%
瓊脂糖凝膠
(大膠用70ml,小膠用50ml):
稱取0.7
g(0.5
g)
瓊脂糖
置於
錐形瓶
中,加入70
ml(50ml)1×TAE,
瓶口
倒扣小燒杯.
微波爐
加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,即成1.0%瓊脂糖凝膠液.
2.
膠板制備:取
電泳槽
內的有機玻璃內槽(制膠槽)洗干凈,晾乾,放入制膠
玻璃板
.取透明
膠帶
將玻璃板與內槽兩端邊緣封好,形成模子.將內槽置於水平位置,並在固定位置放好
梳子
.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內槽玻璃板上,使膠液緩慢展開,直到整個玻璃板
表面
形成均勻膠層.
室溫
下靜置直至
凝膠
完全凝固,垂直輕拔梳子,
取下
膠帶,將凝膠及內槽放入電泳槽中.添加
1×TAE
電泳緩沖液
至沒過膠板為止.
3.
加樣:在點樣板或parafilm上混合DNA
樣品
和上樣緩沖液,上樣緩沖液的最終
稀釋倍數
應不小於1X.用10
ul微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品
小槽
內,每加完一個樣品,應更換一個加樣頭,以防污染,加樣時勿碰壞樣品孔周圍的凝膠面.(注意:加樣前要先記下加樣的順序).
4.
電泳:加樣後的凝膠板立即通電進行電泳,電壓60-100V,樣品由
負極
(
黑色
)向
正極
(紅色)方向移動.電壓升高,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低.當
溴酚藍
移動到距離膠板下沿約1cm處時,停止電泳.
5.電泳完畢後,取出凝膠,用含有0.5
ug/ml的
溴化乙錠
1×TAE
溶液
染色約20
min,再用
清水
漂洗10
min.
6.觀察照相:在
紫外燈
下觀察,DNA存在則顯示出紅色
熒光
條帶,採用
凝膠成像系統
拍照保存.
原理
:
藉助瓊脂糖凝膠的
分子篩
作用，
核酸
片段因其
分子
量或分子
形狀
不同，電泳移動速度有差異而分離。

『肆』 瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 電泳所得各條帶都是什麼

溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，用於觀察瓊脂糖（agarose）和聚丙烯醯胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標准302nm 紫外光透射儀激發並放射出橙紅色信號，可用Polaroid 底片或帶CCD成像頭的凝膠成像處理系統拍攝。
觀察瓊脂糖凝膠中DNA最常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進行染色，溴化乙錠含有一個可以嵌入DNA堆積鹼基之間的一個三環平面基團。它與DNA的結合幾乎沒有鹼基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中，大約每2.5個鹼基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入後，其平面基團與螺旋的軸線垂直並通過范德華力與上下鹼基相互作用。這個基團的固定位置及其與鹼基的密切接近，導致與DNA結合的染料呈現熒光，其熒光產率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射並傳遞給染料，而被結合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種情況下，被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590nm處重新發射出來。由於溴化乙錠-DNA復合物的熒光產率比沒有結合DNA的染料高出20-30倍，所以當凝膠中含有游離的溴化乙錠（0.5ug/ml）時，可以檢測到少至10ng的DNA條帶。
溴化乙錠可以用來檢測單鏈或雙鏈核酸（DNA或RNA）。但是染料對單鏈核酸的親和力相對較小，所以其熒光產率也相對較低。事實上，大多數對單鏈DNA或RNA染色的熒光時通過染料結合到分子內形成較短的鏈內螺旋產生的。
盡管在該染料存在的情況下，線狀DNA的電泳遷移率約降低15%，因此，當需要知道DNA片段的准確大小（如DNA限制酶酶切圖譜的鑒定），凝膠應該在無EB情況下電泳，電泳結束後用EB染色。染色完畢後，通常不需要脫色。但是在檢測小量DNA（小於10ng）片段時，通常要將染色後的凝膠進行脫色

『伍』 瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什麼需要注意什麼事項

一、操作步驟：

1、電泳方法

一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要解析度高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯醯胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠電泳。

2、凝膠濃度

對於瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用質量好的瓊脂糖是解決辦法。

3、緩沖液

常用的緩沖液有TAE和TBE，而TBE比TAE有著更好的緩沖能力。電泳時使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。

4、電壓和溫度

電泳時電場強度不應該超過20V/cm，電泳溫度應該低於30℃，對於巨大的DNA電泳，溫度應該低於15℃。

5、DNA樣品的純度和狀態

注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。乙醇沉澱可以去除多餘的鹽，用酚可以去除蛋白。

6、DNA的上樣

正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。注意太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊，而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。

7、Marker的選擇

DNA電泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正對照DNA來估計DNA片段大小。Marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較准確。

8、凝膠的染色和觀察

實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（EB），染色效果好，操作方便，但是穩定性差，具有毒性。注意觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶則不易觀察，出現條帶模糊的現象。

二、注意事項：

1、巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。

2、高濃度的膠可能使分子大小相近的DNA帶不易分辨，造成條帶缺失現象。

3、電泳緩沖液多次使用後，離子強度降低，pH值上升，緩沖性能下降，可能使DNA電泳產生條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。

4、如果電泳時電壓和溫度過高，可能導致出現條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象。

5、變性的DNA樣品可能導致條帶模糊和缺失，也可能出現不規則的DNA條帶遷移。在上樣前不要對DNA樣品加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。

6、太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊，而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。

(5)凝膠電泳測定條帶的儀器是什麼擴展閱讀

瓊脂糖凝膠具有網路結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決於凈電荷的性質和數量，而且還取決於分子大小，這就大大提高了分辨能力。

但由於其孔徑相比於蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用於核酸的研究中。

蛋白質和核酸會根據pH不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據這個原理可將其分開。電泳緩沖液的pH在6~9之間，離子強度0.02~0.05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。

瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的DNA片段，其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低，但它制備容易，分離范圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb，利用脈沖電泳，可分離高達10^7bp的DNA片段。

DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。

『陸』 聚丙烯醯胺凝膠電泳條帶是什麼意思

許多分子，如氨基酸、多肽、核苷酸等都具有可電離基團，在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動，這就是電泳，由於各種離子的移動速率不同，就把各種不同物質分開，前後分成了一排一排，在光學儀器下便顯示為一條條的光帶，這就是電泳條帶，人們可以根據條帶的寬窄和位置利用已有的資料或軟體，來分析各種物質的成分和含量。

『柒』 生化實驗做聚丙烯醯胺凝膠電泳時剝膠步驟時，材料說注意測量，是測量什麼呀

對的。用直尺分別量取各個標準分子量的條帶到凝膠頂端的距離，計算各個條帶的相對遷移率（
mR =樣品遷移距離（cm）/染料遷移距離（cm）），然後 以標准蛋白質分子量的對數對相對遷移率作圖，得到標准曲線；最後根據待測樣品的相對遷移率，從標准曲線上查出其分子量。

『捌』 sds凝膠電泳用什麼marker

sds凝膠電泳用蛋白marker、彩虹蛋白marker就可以。
蛋白marker可分為：
一、未預染的Marker即寬分子量蛋白標准、高分子量蛋白標准以及低分子量蛋白標准;
二、預染的Marker即單色預染和多色預染。
在western Blot過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節，然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。這個 Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標准量精確無誤了，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標准還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。