RNA純度用什麼儀器測

1. DNA或RNA樣品不純,用紫外分光光度計測定其濃度和純度的准確性會受到影響,為什麼

分光光度計
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶於緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸在波長 260 nm處有最高吸收峰。吸收紫外光的性質是嘌呤環和嘧啶環的共軛雙鍵系統所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它們的物質，不論是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能區分DNA和RNA，只能用來鑒定核酸的純度和含量。
蛋白質由於含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白質的吸收高峰在280nm波長處，在260nm處的吸收值公為核酸的十分之一或更低，故核酸樣品中蛋白質含量較低時對核酸的紫外測定影響不大。RNA的260nm與280nm吸收的比值在2.0以上；DNA的260nm與280nm吸收的比值則在1.9左右。當樣品中蛋白質含量較高時比值即下降。
分光光度計採用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品後，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
DNA和RNA都有吸收紫外光的性質，它們的吸收高峰在260nm波長處，每種核酸的分子構成不一， 因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數。如：1OD 的吸光值分別相當於50μg / ml 的dsDNA，37μg / ml 的ssDNA， 40μg/ml的RNA，30μg/ml的寡核苷酸。測試後的吸光值經過上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度，這些由分光光度計內預設的程序執行，因此，測試前選擇正確的程序，測試樣品的類型，首先測試空白液，然後再測試樣品，注意輸入樣品稀釋倍數。
如何避免吸光值漂移
讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器， 表現出的吸光值漂移越大。事實上，分光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內變化，即儀器有一定的准確度和精確度。
核酸本身物化性質
溶解核酸的緩沖液的pH 值、離子濃度等
在測試時，離子濃度太高也會導致讀數漂移，因此建議使用pH 值一定、離子濃度較低的緩沖液（如TE）可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下（如10 mM Tris-HCl pH 8.0），才能得到精確的檢測結果。水的pH值不穩定，可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收，為了確保准確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
樣品的稀釋濃度
同樣是不可忽視的因素，由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大於0.1A ，吸光值最好在0.1-1.5 A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計的測試范圍）。
操作因素
如混合要充分，否則吸光值太低， 甚至出現負值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數和樣品濃度單位選擇一致；不能採用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
各波長具體含義及相關問題1. A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波長，最佳測量值的范圍為0.1至1.0。如果不在此范圍，稀釋或濃縮樣品，使之在此范圍內；如果吸光度小於0.05，檢查是否存在操作因素（如移液不準確，樣品內有懸浮物等）影響。DNA樣品的A260 吸光度值是否>0.1。（請注意，這個值跟儀器無關，核酸的吸光度必需大於0.1，其值才有效和可靠，因為樣品中的雜質和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收，其值<0.1）；
朗伯－比爾定律：
A 吸光值
I0 入射光強度
I 投射光強度
c 吸光物質的摩爾濃度（mol/L）
d 光通過的液層厚度（cm）
ε 摩爾吸光系數（Lmol-1cm-1）
2. A280nm
是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質的污染，需要純化樣品。比值=1.5相當於50％蛋白質/DNA溶液
3. A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA和 RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小於2.0標明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑污染，需要純化樣品。A230產生負值主要是由於在很低DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導致的。在下一個測定中，需要降低樣品的稀釋度，A230的負值會被校正。
4. A320nm或A340nm
為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0。如果不是，標明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A320一般是 0。
5. A260/A280和A260/A230
是核酸純度的指示值，純度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值應該在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用於評估樣品的純度， 因為蛋白的吸收峰是280 nm。 純凈的樣品比值大於1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低於1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。
A230是多肽、芳香基團、苯酚和一些碳氫化合物的吸光度，A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大於2.0 。A280是蛋白質的吸光度。

2. 核酸檢測實驗室主要儀器有哪些

1、核酸提取儀
核酸提取儀是實驗室的必備儀器，應用配套的核酸提取試劑能夠自動完成樣本核酸的提取工作。核酸提取儀是通過磁珠提取法研製出來的一種高通量、高靈敏度的自動核酸純化提取設備。可以利用機器磁棒架上的磁棒，將吸附有核酸的磁珠移動至不同試劑孔內，經過細胞裂解、核酸吸附、清洗與洗脫等處理，即可得到高純度的核酸。

2、離心機
離心機也是實驗室最基本的儀器，主要是血液離心和DNA、RNA樣品核酸提取時用。這里推薦湖南可成離心機。

迷你離心機可使用可成Super MiniStar迷你離心機，微型離心機外觀新穎獨特，靈巧多用，配備兩種離心轉子和多種試管套，適用於1.5ml、0.5ml、0.2ml離心管和PCR用0.2ml,8連排離心管。
台式高速離心機使用可成台式高速離心機1-16K，該機型體積小，佔用空間小，微機控制，配微量轉子，離心速度上升快，離心效率高，常用於DNA樣品核酸提取。
台式低溫高速離心機可用可成台式高速冷凍離心機 1-16KR，此機型體積小巧，設計緊湊，進口高能效環保製冷系統，具有優良的溫度控制性能，製冷快，是RNA樣品核酸提取的理想選擇。
台式低速離心機推薦使用可成台式低速離心機4-5N，此機型採用無碳刷變頻電機，操作寧靜噪音低，可快速分離血清。且離心腔內設有獨立紫外線滅菌裝置，能使細菌、病毒喪失生存力及繁殖力進而消滅細菌、病毒，達到消毒滅菌成效。

3. rtpcr時提取rna的濃度和純度有什麼要求

rtpcr時提取rna的濃度和純度要求：濃度20ng/ul以上足夠了，如果用的是組織提取，濃度一般很高，可以達到幾百甚至幾千。如果你用的是病毒、少量細胞，濃度低一些也沒有關系。
純度需要用儀器測一下。260/280理論值應該有2.0以上，260/230值1.2以上基本合格。
RT-PCR：最重要的是RNA是否有明顯降解，這個需要跑電泳看。一般來說28S應該比18S亮1.5-2.0倍，說明提取得不錯。

反轉錄·聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是將RNA的反轉錄（reverse transcription ）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組 DNA的污染。
提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo（dT）或隨機引物利用反轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板經行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。

4. 熒光光度法能否用於RNA樣本的濃度測定為什麼

你說的應該是分光光度法。是可以的測定RNA濃度的，另外，可利用OD260和OD280的比值來確定其純度。

5. 如何檢測RNA提取成功或如何檢測RNA的完整性

檢測RNA的完整性的方法：

1. 完整的總RNA在進行變性凝膠電泳時會產生清晰的28S和18S rRNA條帶（真核樣品）。28S rRNA條帶的強度應當大致為18S rRNA條帶的兩倍。這種2:1的比率（28S：18S）是判斷RNA完整性的一個很好的指標。

2. 使用變性凝膠電泳來評估RNA完整性的一個缺陷是觀察所需的RNA樣品量。通常情況下，需要在變性凝膠中上樣至少200 ng的RNA才能在EtBr染色下進行觀察。而在某些RNA制備實驗中，如從穿刺活檢樣品或激光捕獲顯微切割樣品中提取RNA，得率是非常低的。這種情況下，或許就不可能在進行表達譜分析實驗前取出200ng的RNA來評估其完整性。其它的核酸染料，比如Moleculor Probes (Eugene, OR) 的SYBR&#174; Gold及SYBR Green II RNA染料，相比傳統的瓊脂糖凝膠電泳EtBr染色方法可以顯著提高靈敏度。通過使用300nm的透射光源（6 x 15瓦的燈泡）及特殊的濾光片，SYBR Gold RNA凝膠染色可以檢測到低至1ng的RNA，而SYBR Green II則可以檢測到2ng，從而可以使用更少的樣品來進行RNA完整性分析。

3. 目前有一種快速簡單的方法可以替代傳統的凝膠分析方法，這種方法可以同時對RNA樣品進行定量及質量評估。Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies)是第一款商業化的提供RNA樣品狀態細節信息的微流體儀器。當與RNA 6000 LabChip&#174;（Caliper Technologies Corporation所擁有的一個注冊商標）結合使用時，每次進行分析最低僅需1&#181;l濃度為10 ng/&#181;l 的樣品。除了評估RNA完整性，這台自動化系統同樣可以提供樣品RNA濃度及純度（如mRNA制備中的rRNA污染）的評估。在過去，檢測濃度及純度需要使用部分RNA樣品（通過A260分光光度法），而評估完整性則需要另外使用部分樣品。通過使用LabChip&#174;系統，可以僅使用一份5ng的樣品來同時對濃度、完整性及純度進行分析。分析數據可以顯示為類凝膠圖像、電泳峰圖及表格形式等。
   

6. 如何用酶標儀測定RNA濃度

換濾光片，340、280、260、230
石英的96孔板，每個孔的體積為200ul，空白直接200ulDEPC水，實驗組196ulPEPC水+4ulRNA
如果換了濾光片了，測試步驟與MTT測試步驟差不多，主要就是設置吸光度，點擊四次吸光度，設置為340、280、260、230。
1、進板後確定板類型和板孔
2、設置吸光度，點擊四次吸光度，分別設置為340、280、260、230。
3、開始

酶標儀即酶聯免疫檢測儀是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。 測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。

7. 如何測量RNA的純度和含量

RNA膠（凝膠成像）檢測。例如：原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。

凝膠遷移分析。可以用來研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：結合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢，因而可以區分出結合蛋白與未結合蛋白的RNA條帶。RNA-seq即轉錄組測序技術，把mRNA，smallRNA等用高通量測序技術把RNA的序列測出來。反映出RNA的表達水平。

RNA純度：RNA在純化過程中容易受到DNA、蛋白質及有機溶劑的影響，這些殘存物將會影響以後的操作。光譜分析(NANODROP)利用物質對不同波長光的吸收度的不同，可以鑒別出溶液純度及濃度。

組成結構

RNA和DNA一樣，也是由各種核苷酸通過3′，5′-磷酸二酯鍵連接構成的多核苷酸鏈，但與DNA有一系列差異。

在化學組成方面，RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是，每個tNA分子含有一個胸腺嘧啶，這是在RNA鏈合成後由尿嘧啶甲基化生的，此外，前面已提到，少數DNA含有少量核糖，但這些個別的例外並不能以此否定兩類核酸組成上的差異。

以上內容參考：網路-核糖核酸

8. 哪些型號的酶標儀可以檢測rna dna 純度

不叫酶標儀吧，叫分光光度計，比較多人用nanodrop，進口的比較貴，也有國產的，是根據吸光度檢測的，一般酶標儀是用來檢測免疫反應的，elisa出來的濃度

9. 如何確認RNA的質量

1、RNA膠（凝膠成像）檢測。例如：原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。

2、凝膠遷移分析。可以用來研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：結合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢，因而可以區分出結合蛋白與未結合蛋白的RNA條帶。

3、RNA-seq即轉錄組測序技術，把mRNA，smallRNA等用高通量測序技術把RNA的序列測出來。反映出RNA的表達水平。

(9)RNA純度用什麼儀器測擴展閱讀

1、RNA的功能是：

（1）具有肽醯轉移酶的活性。

（2）為tRNA提供結合位點。

（3）在蛋白質合成起始時，參與同mRNA選擇性的結合，在肽鏈的延伸中與mRNA結合。

16 S的rRNA3』端有一段核苷酸序列與mRNA的前導序列是互補的，這可能有助於mRNA與核糖體的結合。

2、凝膠成像對DNA或RNA膠 進行切膠、拍照、觀察、分析的實驗室類儀器，凝膠成像系統可以應用於分子量計算、密度掃描、密度定量、PCR定量等生物工程常規研究。

10. 如何根據紫外分光光度法測定rna+260和a80結果分析ra濃度和純度

摘要 過總量，純度與完整性三大項檢測來確認RNA質量： 1總量：微量分光光度計測260nm吸收值計算。 2純度：微量分光光度計測260nm/吸收值的比值，用於評估有機溶劑殘留；260nm吸收值的比值，用於評估蛋白質污染比例。