⑴ 請教流式細胞儀的選購 BD FACS Calibur的分選效果如何
這款儀器非常老舊了。國際上也早就淘汰了。BD在除了中國的市場也已經快要停止對這款儀器的技術支持。作為分析用還湊合,分選的效果很差,很慢,效率低。技術非常古老了。
分選推薦BD Aria III或者Fusion
⑵ 關於BD流式細胞儀的問題,流式細胞儀雙激光八色與三激光八色有何區別
不管哪家的流式,每種激光都可以配置一定數量的檢測通道(也就是對應的顏色數量)。同樣是八色,配置了三個激光的肯定是明顯優於兩個激光的。兩個激光配八色通道,已經是兩個激光的極限了,沒有進一步升級的可能,而且所選的顏色限制很大,實際並不能同時檢測8色。而三色激光,配置8個通道,還有升級的空間,被檢顏色的選擇范圍也要大的多。
⑶ 生名科學實驗室常用儀器有哪些
拜託,標題別寫錯別字,改改。
1、樣品保存:
冰箱/超低溫冰箱(thermo,sanyo)
液氮罐(thermolyne,sanyo)
2、樣品前處理:
移液器(gilson,ependof,biocos)
天平(梅特勒,賽多利斯)
均質/攪拌系列(IKA,KINEMATICA,LABSCAN)
離心機(sigma,日立,ebendof,hettich,beckman)
凍干機(telstar,sanyo)
高壓滅菌器(MMM,SANYO,STURDY)
電泳儀(bio-rad,epondorf)
3、培養過程
培養箱系列(sanyo,labscan,binder,mmm)
生物安全櫃/超凈工作台(telstar,baker,thermo)
發酵罐(infors,labconco)
搖床(IKA,INFORS,LAB-LINE)
水浴(LABSCAN,JULABO)
轉瓶機(WHEATON,IBS)
PCR(thermo,epondorf,ABI,BIO-RAD,MJ)
酶標儀(bio-rad,thermo,epondorf,ABI)
4、觀察分析
顯微鏡(olympus,leica,nikon)
菌落計數儀(INTERSCIENCE)
流式細胞儀(bd,日立)
DNA測序儀(ABI)
高效色譜系列(agilent,whatman,abi,dionex,mathon)
5、其它
洗瓶機(labconco,miele)
超純水系列(MILLIPORE,ELGA,PALL)
超聲波清洗(YAMATO)
等等,其它設備還有很多,要根據實驗內容配置。
⑷ 你好,做人源一抗 流式抗體實驗,用BD哪種型號流式細胞儀好
這么多抗體,但是只列了六個顏色。你是怎麼計劃的呢?
如果一次染六個。基本上現在常見的機器是都可以做的。比如Fortessa, LSRII 等等。
⑸ bd十色流式細胞儀都有什麼型號
只要能配置3種以上激光的儀器都可以測10色。這個和型號的關系不大,除了某些型號只能配置2種激光外,其他機器都可以。但是要看買的時候是否都配齊了。
比如LSRII,可以配4種激光,可以檢測14種顏色。但是如果買的時候只配了2個激光,型號還是LSRII,但是就不能檢測10色了。
⑹ 在醫院用於臨床工作的流式細胞儀多是什麼牌子什麼型號的
一般是BD或者貝克曼的。
⑺ 美國BD公司生產的流式細胞儀哪一款型號比較全面,適合於普通醫院檢測診斷比較新的型號是哪一款
這個主要看你要做的檢測指標了。不一定要可檢測的顏色越多越好。
常見的LSR II, 可以裝4個激光,14種顏色,完全可以滿足一般的臨床檢測需求。
⑻ 如何選擇適合的流式抗體(五):舉例
舉例一:BD流式儀器FACSCalibur試劑選擇及常見問題解答
一、如何搭配流式抗體熒游標記
流式抗體熒游標記搭配主要由3個因素決定的:流式細胞儀能檢測多少個通道、需要同時檢測檢測多少個指標、廠家的抗體有多少種熒游標記。如果流式細胞儀的通道越多,那麼同一份樣本能同時做的表面/胞內標志就越多
A、如何根據流式細胞儀搭配流式抗體
1)BD流式細胞儀(06版目錄第614頁)
流式細胞儀能檢測多少個通道是由有多少根激光決定的以及每根激光的功能決定的,所以首先需要注意兩點:
流式細胞儀有哪些激光。比如標配的FACSCalibur只有一根488nm的激光,能做FL1、FL2、FL3三個熒光通道/三個顏色,而選配的Calibur(FACSCalibur的簡稱)配有488nm和635nm兩根激光,可以檢測FL1-FL4四個通道/4個顏色。
不同型號的流式細胞儀的同樣的一個通道檢測熒光素的能力是不一樣的,比如Calibur的FL3(第3通道)能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能檢測的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道檢測。Calibur和LSR都能檢測4個顏色,但是第4個通道檢測熒光素是不一樣的
搭配熒光素原則
搭配流式熒光素有2個原則:每個通道只能選擇1種熒光素;各個通道之間的熒光素可以隨意搭配,但需注意
1、每個通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說明,Calibur的FL1通道選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488,或者選擇了AlexaFluro488就不能選FITCCalibur的FL3通道盡管能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五個熒光素,但是我們我們搭配的時候只能選擇其中1個。
2、各個通道之間的熒光素可以隨意搭配:如果客戶的流式細胞儀能做4個通道,在第1個原則之下,那麼每個通道隨便選出1個熒光素就可以組合成4個顏色。以2跟激光的Calibur為例,Calibur各個熒光素之間可以搭配出16種組合。
比如常用的搭配是FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4),這個搭配組合可以更改成AlexFluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+AlexFluro(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等。總之,在第1原則之下,我們可以隨意搭配和組合各個熒光素。但是需要注意的是,APC和PE-Cy5一起使用的話,上流式以後,容易導致補償過度
B、BD公司抗體有多少種熒光素
1)供應商能提供的每種抗體的熒光素是不一樣的我們需要根據同時結合供應商能提供的每種抗體的熒光素進行搭配。原則上同一個標志的不同的克隆號帶同1個熒光素在應用上沒有區別的,但是有些不同克隆號的抗體之間可能會有一些稍微的差異,需要仔細看說明書。我們可以盡量選擇在說明書上有流式圖形的抗體,或者選擇熒光素種類最多的克隆號的抗體
2)熒光素
可以登陸www.bdbiosciences.com/spetra,輸入熒光素和檢測的BD流式細胞儀機型及激發光,就可以查到相應的波長。
為什麼要推薦使用AlexFluro488和AlexFluro647呢?
因為這些熒光非常明亮,對激光非常穩定,適合流式細胞儀的光譜性質,對PH值不敏感,具有水溶性。此外,他們聯合使用時發射光譜存在巨大差異,無需補償。
C、如果檢測的指標數目超過了流式細胞儀的通道,怎麼辦?
如果需要做5個指標,而流式細胞儀只能做4個通道,首先將指標歸成2類,再將樣本分成2份,分別檢測。比如需要同時檢測CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma,那麼將樣本分成兩份,第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4,而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型對照(IsotypyControl)
1、為什麼要用同型對照?
同型對照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白,用於消除由於抗體非特異性與細胞結合而產生的背景染色。同型對照是真正意思上的陰性對照,它不但可以用來設定流式細胞儀的電壓,而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細胞因子競爭封閉步驟。在流式細胞儀上樣前,染色方式如下:
樣本管:一抗+樣本
同型對照管:同型對照+樣本
2、如何選擇同型對照?
一般選擇與一抗的成分完全相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒游標記的抗體,比如抗人的CD56APC標記的抗體,貨號是555518,成份是MouseIgG1,κ。那麼它的同型對照應該是APC標記的MouseIgG1,κ,貨號是555751。注意同型對照的成份跟它的名稱是相同的.如果是抗體的組合形式是純化的一抗+熒游標記的二抗,那麼應該選擇一抗的同型對照。比如CDw125的純化抗體,貨號是555901,成分是MouseIgG1,κ。它的同型對照是純化的MouseIgG1,κ,貨號是555746。它的二抗PE標記的抗小鼠IgG1,貨號是550083。那麼染色方式如下:
樣本管:純化的CDw25+PE標記的抗MouseIgG1+樣本
同型對照管:純化的同型對照+PE標記的抗MouseIgG1+樣本
如果沒有找到適合的同型對照,在保持來源相同、熒游標記相同、免疫球蛋白類別相同條件下,那麼優先選擇的順序應該是亞鏈不同--亞型不同--相同類別。比如,某種的抗體的來源是MouseIgG2а,κ。如果在同型對照表裡面找到不到完全相同的同型對照,那麼優先選擇相同熒游標記的MouseIgG2а為同型對照。如果也沒有找到MouseIgG2а,那麼優先選擇相同熒游標記的MouseIgG2b作為同型對照。如果最後還是沒有找到MouseIgG2b,那麼選者相同熒游標記的MouseIgG2作為同型對照。
3、如何查找同型對照?
同型對照在BD英文目錄中或者BD網站上跟它對照的抗體的位置是一致的。BD目錄中,抗人的抗體的同型對照都在HUMAN章節後面。抗小鼠的抗體的同型對照在MOUSE章節後面,非人類靈長類的抗體同型對照在NONHUMANPRIMATE章節後面。由於抗大鼠的抗體非常少,大部分抗體都是小鼠來源的,所以它的同型對照跟小鼠的一樣,放在MOUSE章節後面。胞內細胞因子、趨化因子、補體、炎症介質及其受體的同型對照放在其章節的後面(注意:人的胞內細胞因子的同型對照跟人的表面標志的同型對照是不在一起的)。Phosflow的同型對照在Phosflow的介紹後面。比如,比如抗人的CD56APC標記的抗體,貨號是555518,在06版BD目錄的169頁,成份是MouseIgG1,κ。那麼它的同型對照應該是在HUMAN章節中MouseImmunoglobulinIsotype表格中,第191頁,APC標記的MouseIgG1,κ,貨號是555751。
4、哪些客戶需要使用同型對照?
A對流式不是非常熟悉的客戶。
B做胞內流式客戶,比如胞內細胞因子、趨化因子和信號蛋白等。
C使用不常見的標志或者特異性不高的標志的客戶,因為客戶不熟悉不常見標志的表達情況,根據同型對照可以判斷陽性細胞的位置。一些特異性不高的抗體,如多抗,非特異性結合非常多,使用同型對照可排除假陽性。
D對流式非常熟悉又使用常用的表面標志的客戶一般可以不使用同型對照。
5、為什麼有時候同型對照的表達會比抗體的表達高?
首先需要檢查同型對照的抗體是否加錯類型、劑量等。其次,因為有些標志在細胞的表面或者胞內表達不高,而跟其類似的抗原非常多,那麼加入同型對照時,同型對照非特異性的結合會超過抗體的特異性,所以會造成這種現象,在細胞表面時如圖所示。這個時候推薦使用其他陰性對照,如空白對照等。
三、補償微球
流式細胞儀的熒光補償隔一段時間之後需要調整到適合的位置。如果熒光補償沒有調節好,會導致細胞分群不明顯或者流式檢測得到的結果圖非常不漂亮,而且會影響到檢測結果的不真實。熒光補償的調節對初學者來說非常不容易掌握,同時,補償調節是流式細胞術中比較難掌握的操作。尤其是一些不常見的標志檢測時,需要經驗非常豐富的流式操作者根據多年的經驗判斷調節補償,才可以得到比較好的數據和圖片。那麼,現在不需要這么麻煩。因為補償微球讓一切變得更簡單。BDCompBeads是專用於流式細胞儀多色分析的熒光補償調整微球。它的實用性是在於克服了以往普通的做三色以上的流式分析時補償難調、耗費樣本(往往用待測樣本單標來進行補償調節)的缺點。它本身不攜帶任何熒光,藉助於與客戶自己的特異性熒光抗體孵育結合來調節補償。它不但能象待測的樣本細胞一樣在同樣的實驗條件下固定、破膜等,操作起來很簡單,靈敏度高,一致性好,使補償更輕松更准確,而且最難得的是它最適合於多色分析(如五色、六色、七色等)和復合熒光素(如PE-Cy7、APC-Cy7等),因為這時的補償往往難度較大。各型號的流式儀器均能使用。Compbeads使用後可以將流式的條件保存,方便下次做同樣的熒光染色搭配時參考用。
⑼ BD推出新型流式細胞儀怎麼樣,那裡能了解生物方面的最新資訊
全球流式細胞儀巨頭BD生物科學公司最近推出了BD FACSVerse�6�4流式細胞儀。這款流式細胞儀目前有4色、6色和8色配置,帶有前向角散射和側向角散射,支持最多10個參數。4色和6色系統可通過升級而擴展。該系統體積小巧,能夠輕松安裝在標準的實驗室檯面上。 BD FACSVerse的光學系統特有微型化的檢測光學裝置,以及整合在濾光片裝置中的微處理器,讓配置檢測自動化。如果儀器配置與定義的實驗參數不一致,儀器會發出警告,從而保證了結果的可靠性。 你可以到生物幫那裡詳細的了解一下,在那裡就有這方面的介紹的,我知道那裡的資訊,文檔比較全面,應該會對你有幫助的。 你可以去參考一下啊 www.bio1000.com/zt/cell/33895.html 希望對你有幫助。 真空驅動的流體設備,獨特的樣品注射管(SIT)改善了系統可靠性和信號解析度。除了標準的高、中和低流速,BD FACSVerse系統還包括了一個特殊的高靈敏度流體模式,用於檢測模糊染色的顆粒。新的流體設計還允許你選擇樣品輸入裝置。你可從微量離心管(~500 μl)到大的錐形管(最多50 ml)中靈活選擇。 有了全新的BD FACSuite軟體系統,用戶可讓常規任務自動化,如儀器啟動、設置、樣品採集和數據分析,並以最少的點擊完成其他工作。軟體包的模塊化結構讓用戶可執行多項任務,在系統採集數據的同時開展數據分析。BD FACSuite軟體還能將分析和實驗導出至其他BD FACSVerse系統,最大限度地降低了常常遇到的系統和用戶差異。BD FACSVerse流式細胞儀有著內置的智能性,旨在減少失誤,提高效率,讓過程自動化,並盡量減少用戶的交互。 為了支持廣泛的應用,系統提供了一些預先定義的BD研究分析,如凋亡、細胞周期、細胞增殖和細胞因子檢測,這些分析與BD的試劑盒匹配,能帶來重復的結果。系統也支持用戶自定義的實驗開發。研究人員可將他們的實驗轉化成可重復使用的分析,包括相關設置、獲取和分析表。他們還可以建立報告參數,以便減少用戶和實驗室之間的數據差異。 BD生物科學細胞分析部門的總裁James Glasscock稱,他們將前沿的創新融入BD FACSVerse系統,但同時本著三個原則。第一,他們希望為研究人員提供單個系統,此系統能夠精確重復地處理常規應用以及復雜的多色實驗。第二,他們試圖簡化流程,讓系統更為易用。第三,他們為用戶提供了升級路徑,可從6個參數升級到10個參數,以及多個可選性能,以便滿足未來的研究需求。
⑽ 我想了解一下流式細胞儀有那幾個品牌謝謝!
BD 和BECKMANCOULTER,這兩個是國內市場佔有率最高的,還有德國的PARTEC和密理博的流式細胞儀,BD和BECKMANCOULTER的是最好的了。