跑蛋白膠的儀器是什麼

A. 生物實驗中的「跑膠」是什麼意思

瓊脂糖凝膠製作膠板從而讓樣品在膠板上產生電泳，簡稱「跑膠」。

分子生物學中的跑膠會出現條帶，是因為帶電荷的生物大分子在電泳池裡的運動速度決定於該分子的分子量，所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成條帶，進而實現了分離純化生物大分子的目的。

(1)跑蛋白膠的儀器是什麼擴展閱讀

所需要的儀器：

1、電泳槽：電泳槽是電泳系統的核心部分，根據電泳的原理，電泳支持物都是放在兩個緩沖液之間，電場通過電泳支持物連接兩個緩沖液，不同電泳採用不同的電泳槽。

2、電源：要使荷電的生物大分子在電場中泳動，必須加電場，且電泳的解析度和電泳速度與電泳時的電參數密切相關。不同的電泳技術需要不同的電壓，電流和功率范圍。

參考資料

網路-電泳

網路-瓊脂糖凝膠電泳

B. 用跑蛋白的裝置跑DNA聚丙烯凝膠可以嗎

他那個本身就是聚丙烯醯胺凝膠的。可以。
梳子可以用齒數更多一些的，因為DNA的話不用那麼大量的上揚，3-10ul都可以了
電壓用10v/cm應該可以。染色採用銀染法，這樣靈敏度比較好，也可以用eb顯色。

C. western protein中跑膠是什麼意思

要做western，第一個步驟就是用聚丙烯醯胺凝膠（SDS-PAGE）來分離蛋白，這個過程就是跑膠。因為蛋白是混合物，通過凝膠電泳（跑膠）以後，可以把不同分子量大小的蛋白分開，分子量大的蛋白涌動的慢，分子量小的泳動得快，就在膠上顯出條帶。然後再把膠上分離開的蛋白再轉移到膜上，才能進行抗體後續雜交等工作，檢測有沒有目標的蛋白條帶。如果不進行電泳分離，蛋白都混在一起，就沒法知道是不是含有目標蛋白了。

D. western blot 顯影使用ECL法，可以使用一般的凝膠成像儀嗎，就是做核酸電泳用的那種儀器

這個和有什麼光關系不大，是否能夠拍攝到ECL的圖像主要取決於設備是不是帶有冷CCD。只有製冷的CCD才夠靈敏度捕捉到膜上發出的光。
普通用於拍攝核酸和蛋白膠的相機就是普通CCD，天能2500就是普通的凝膠成像，ECL那麼弱的光，一點都拍不到的。
要麼找更高端的機器，要麼就只能用膠片曝光了，否則無法觀察ECL的條帶。
你試試找找伯樂，Alpha什麼的有高端成像儀的實驗室，或者就找有暗室的實驗室。

E. 紅光膠原蛋白機是什麼

紅光膠原蛋白機是最新研製的一種幫助身體補充膠原蛋白的日光浴機。通過膠原蛋白光譜促進肌膚中膠原蛋白結構的重建。使用一次膠原蛋白機相當於做3、4次面膜的功效。
燈管採用可見紅光中頻率為610-650納米的光波，改善皮膚的血液系統和淋巴系統的微循環，加速新陳代謝並刺激血液循環，令肌膚紅潤有光彩。並將光能轉化為細胞能，刺激纖維細胞產生膠原蛋白和彈性蛋白，恢復皮膚彈性及質感，從根本上改善皮膚健康狀態，令肌膚緊致平滑有光澤。並大大提高皮膚對保養品的吸收能力。長期使用會使肌膚顏色和結構組織得到明顯的改善，從而減少皺紋，收縮毛孔，使肌膚看上去更緊致豐潤。

F. 迪申蛋白預制膠，跑蛋白膠就是輕松!!!

上海迪申的可以！11

G. Western blot實驗需要准備什麼試劑和耗材

1.1細胞

①將細胞培養皿置於冰上，用冰冷得PBS洗滌細胞2次

②吸出PBS，加入裂解液（碧雲天P0013；1%TritonX-100；）

a.融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鍾內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據實驗需要加入適當的上述蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。

b.對於貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞1-2秒後，細胞就會被裂解。（一般10*7個細胞用100ul裂解後獲得的上清蛋白濃度約為2-4mg/ml）

③用刮刀刮下貼壁細胞，轉移至EP管，14000rpm離心5分鍾

④將上清液轉移至EP管，負20℃保存

1.2組織

①將組織樣品剪成細小碎片（最好在冰上進行）

②加入裂解液

a.融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鍾內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據實驗需要加入適當的上述蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。

c.按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

d.用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。如果組織樣品本身細小，可適當剪切後直接加入裂解液，通過強烈渦旋使樣品裂解充分

（每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200微升本裂解液裂解後獲得的上清，其蛋白濃度約為15-25mg/ml，不同狀態的不同組織有所不同）

③充分裂解後，10000-14000g離心3-5分鍾，取上清

2. 蛋白定量（Thermo UF289356)

2.1稀釋白蛋白(BSA)標准液的制備

2.2 制備BCA工作液（A液：B液=50：1 密閉室溫可以保存一段時間）

總體積=（#標准孔+#未知孔）*#復孔*每個樣本的體積

測試管每管2ml;96孔板每孔200ul。

2.3 濃度測定

①將25ul標准液和樣本設置復孔加入96孔板，按照樣本：BCA工作液（1：8）加入200ul BCA工作液(如果樣本有限就加10ul比例用1：20；推薦每個待測的樣本做2-3個平行反應；根據樣品的濃度，可提前稀釋5-10倍)

②最好搖勻30秒，將96孔板在37℃孵育30min

③冷卻至室溫，酶標儀設置為562nm，在5分鍾內測試完所有的樣本。

④所有的樣本減去空白對照在562nm處的吸光度，繪制標准曲線，確定樣本的濃度

3. 蛋白電泳

3.1 變性以及還原蛋白

在蛋白樣品中加入含SDS（保證樣品中的所有蛋白帶電荷一致）的上樣緩沖液，100℃加熱煮沸。

3.1.1室溫溶解蛋白上樣緩沖液（5×），按照4 uL蛋白樣品+1 ul (5×)的比例混合。

3.1.2 100℃或沸水浴加熱10分鍾，以充分變性蛋白

3.1.3 冰上驟冷，直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔即可

3.1.4通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近則可以停止電泳

4. SDS-PAGE凝膠電泳

4.1 膠的選擇與制備（根據目的蛋白的大小，選擇合適的分離膠的濃度）

4.2 配膠（碧雲天P0012AC）

洗干凈玻璃板，裝板加水驗漏後，晾乾裝到制膠架上。根據配方配膠。

（配膠順序：先配分離膠（下層膠），充分凝固後，再配濃縮膠（上層膠））

4.2.2 配製濃縮膠（上層膠）

4.2.3 組裝制膠器

①將制備好的分離膠灌入制膠板內（緩慢不要有氣泡），隨後緩慢加入適量異丙醇壓平分離膠。

②20-30分鍾分離膠凝聚完成，傾斜板，倒掉異丙醇，吸水紙吸去殘余液體，棄去上層壓膠的水或醇。

③加入配好的濃縮膠灌入制膠板內，然後插上梳子，20-30分鍾濃縮膠即可凝聚。

④緩慢取出梳子，上樣。

4.2.4 上樣及電泳

①蛋白冰上溶解，調整蛋白濃度，和等體積5×上樣緩沖液混合，即為上樣液。用純水沖洗膠板，放入電泳槽

②兩塊板之間倒入電泳液，確認無漏液

③迅速拔出梳子，用槍輕輕吹孔使碎片沖出

④依次加入蛋白marker和蛋白樣品，每孔加上樣液20ug，留一孔加預染的marker.加滿電泳緩沖液，蓋上槽蓋，接通電源，先用70V恆壓電泳，約30min,當指示劑溴酚藍進入分離膠後改用90V恆壓電泳，當指示劑到達距凝膠下端約0.5cm處時關閉電源，取出膠板。（上樣時間盡量短，避免樣品擴散，但也不能過快避免樣品溢出而造成相鄰加樣孔的交叉污染，未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液）

⑤調節電泳的電壓和時間，傳統膠是上層膠80V，30min;下層膠120V 90-120min.

(為了防止蛋白條帶再凝膠上擴散，電泳後應盡快轉膜)

5. 轉膜

將蛋白凝膠中的蛋白，通過電流作用轉移到轉印膜上。由於蛋白凝膠本身易碎，蛋白條帶容易子啊凝膠中擴散，而且抗體也不易於進入凝膠中與目的蛋白結合，所以需要在轉印膜這樣的固相載體上實現後續封閉、洗滌，顯色等實驗操作。

5.1 轉膜

①將減好的PVDF膜用無水甲醇潤濕30秒以上，然後用dd H2O漂洗2min,浸泡於轉移緩沖液中5min後開始後續操作

②裝配轉膜三明治結構（在轉移緩沖液中制備三明治可以避免氣泡的產生）

黑面（負極）→海綿墊→3層濾紙→凝膠→轉印膜→3層濾紙→海綿墊→紅面（正極），每層之間不能有氣泡。然後將三明治轉移至電泳槽中，黑面對黑面。

H. 據說跑蛋白膠實驗有毒性，對實驗員身體有影響，是否屬實

蛋白電泳所用的丙烯醯胺和甲叉雙丙烯醯胺單體都是有毒性的，理論上說，配製成凝膠後形成的聚丙烯醯胺凝膠但是安全的，直接用手碰觸也沒有關系。
但是即使是交聯好的凝膠也不能保證沒有任何單體分子的存在，因此，還是要注意防護。
所以在配置凝膠儲備液的時候要戴手套，最好也戴口罩，在制膠時也應有手套保護防止皮膚接觸。工作台及時清理，在實驗室穿著實驗服也是必要的。

大量的動物試驗研究表明丙烯醯胺主要引起神經毒性；此外，為生殖、發育毒性。神經毒性作用主要為周圍神經退行性變化和腦中涉及學習、記憶和其他認知功能部位的退行性變；生殖毒性作用表現為雄性大鼠精子數目和活力下降及形態改變和生育能力下降。

甲叉雙丙烯醯胺，是強烈的神經毒素，對末稍神經系統有很強的破壞性。如果長時間在高濃度的丙烯醯胺環境下工作，會有手指顫動等症狀。

另外在配膠中使用的過硫酸銨也有一定毒性，對皮膚粘膜有刺激性和腐蝕性。吸入後引起、喉炎、氣短和咳嗽等。眼、皮膚接觸可引起強烈刺激、疼痛甚至灼傷。口服引起腹痛、惡心和嘔吐。長期皮膚接觸可引起變應性皮炎。

TEMED對粘膜和上呼吸道組織及皮膚有很大的破壞作用：強神經毒性。

I. 血紅蛋白凝膠過濾層析所需儀器、用具、物品和實驗的具體方案

一、實驗目的

1.了解凝膠柱層析的原理及應用；

2.掌握凝膠柱層析的基本操作技術，為進一步掌握離子交換柱層析、親和層析及吸附層析等其它分離方法打下良好的基礎。

二、實驗原理

凝膠層析：原理與應用

凝膠層析又稱凝凝膠過濾，是一種按分子量大小分離物質的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中，然後用緩沖液洗脫。大分子無法進入凝膠顆粒中的靜止相中，只能存在於凝膠顆粒之間的流動相中，因而以較快的速度首先流出層析柱，而小分子則能自由出入凝膠顆粒中，並很快在流動相和靜止相之間形成動態平衡，因此就要花費較長的時間流經柱床，從而使不同大小的分子得以分離。

>

凝膠過濾柱層析所用的基質是具有立體網狀結構、篩孔直徑一致，且呈珠狀顆粒的物質。這種物質可以完全或部分排阻某些大分子化合物於篩孔之外，而對某些小分子化合物則不能排阻，但可讓其在篩孔中自由擴散、滲透。任何一種被分離的化合物被凝膠篩孔排阻的程度可用分配系數Kav（被分離化合物在內水和外水體積中的比例關系）表示。Kav值的大小與凝膠床的總體積（Vt）、外水體積（Vo）及分離物本身的洗脫體積（Ve）有關，即：

Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)

在限定的層析條件下，Vt和Vo都是恆定值，而Ve值卻是隨著分離物分子量的變化而變化的。分離物分子量大，Kav值小；反之，則Kav值增大。因此，在同一凝膠柱上分離分子量不同的物質時，由於流動相的作用，這些分離物質將發生排阻和擴散效應。若緩沖液連續地傾入柱中，柱中物質的排阻和擴散效應也將連續地發生，其最終結果是分子量大的物質先從柱中流出，分子量小的物質則後從柱中流出。流出物用部分收集器分管等量或等時地收集起來，檢測後分段合並相同組分的各管流出物，即等於把分子量不同的物質相互分離開了。其分離效果受操作條件（如基質的顆粒大小、均勻度、篩孔直徑和床體積的大小、洗脫液的流速以及樣品的種類等）的影響，而最直接的影響是Kav值的差異性，Kav值差異性大，分離效果好；Kav值差異性小，則分離效果很差，或根本不能分開。

分配系數Kav既是判斷分離效果的一個參數，又是測定蛋白質分子量的一個依據。從公式Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)可知，只要測出床體積Vt 和外水體積Vo 以及洗脫體積Ve，即可計算出Kav值。而凝膠床總體積Vt可用測量法得到：

由凝膠床的組成可知，床體積Vt等於外水體積Vo、內水體積Vi與凝膠顆粒實際佔有體積Vg之和。即

Vt = Vo+Vi+Vg = Vo+Vi

而Vo和Vi可通過實驗測得：當把分子量不同的混合溶液鋪在凝膠床上時，其在內水體積和外水體積中的分布是不一樣的。溶液中的分子大於凝膠孔徑上限者不能進入凝膠網孔內，而被排阻在外水體積的溶液中。凝膠床的洗脫體積Ve剛好等於外水體積。即Ve=Vo (Kav=0)。然而，溶液中的分子小於凝膠孔徑下限者能自由進入凝膠網孔內，凝膠床的洗脫體積Ve應等於凝膠床總體積，即Ve= Vt= Vo+Vi (Kav=1)。而溶液中的分子大小介於凝膠孔徑上限和下限之間者，則能進入部分凝膠網孔中，故其洗脫體積Ve是在Vo和Vt之間（Kav在0－1之間）。

以床體積Vt（等於pr2h）和測得值Vo來計算分配系數的值為Kav，若以床體積Vt（等於Vo+Vi）和測得值Vo來計算分配系數的值為Kd。在同一層析條件下，對同一物質計算出來的Kav和Kd值盡管有一定的差異性，但都是有效的。只因Kav計算方便，所以目前多使用Kav。分離物在凝膠過濾層析時的行為，除用Kav和Kd表示外，還可用Ve/Vo或Vo/Ve（R值）表示。

反應原理

凝膠過濾不僅常用做物質的分離，還可以根據需要用某種試劑非常方便地處理某種物質，當該物質流經試劑區時，因為可連續接觸新鮮試劑，因而可以充分發生反應，最後經過洗脫，再與過量的試劑分開。本實驗就是通過凝膠過濾，用還原劑FeSO4處理血紅蛋白。即首先在層析柱中加入含有還原劑的溶液，使形成一個還原區帶，當血紅蛋白樣品（血紅蛋白與鐵氰化鉀的混合液）流經還原區帶時，褐色的高鐵血紅蛋白立即生成紫色的還原型血紅蛋白，隨著還原型血紅蛋白繼續下移，與緩沖液中的氧分子結合又形成了鮮紅的血紅蛋白。鐵氰化鉀則因分子量小，在層析柱中呈現其本來的黃色帶而遠遠地落在血紅蛋白的後邊。本實驗操作簡便，直觀性強，趣味性濃，通過肉眼觀察即可檢驗分離效果。

三、實驗材料

1.器材：層析柱，?10×200

2.試劑：

(1) 20mM磷酸二氫鈉

(2) 20mM磷酸氫二鈉

(3) 40mM FeSO4(用時現配)

(4) 0.2M Na2HPO4，80mM Na2H2EDTA

(5) 抗凝血（哺乳動物血樣，以1：X的比例加入%檸檬酸鈉，置於4℃冰箱中保存。貯存期以不超過3個月為宜）

(6) Sephadex G-25

(7) 固體鐵氰化鉀

四、儀器設備

鐵架台、恆流泵

五、實驗步驟

1．凝膠的處理 取3克葡聚糖凝膠（Sephadex-25）乾粉，浸泡於蒸餾水中充分溶脹（室溫，6小時），然後傾斜法除去表面懸浮的小顆粒，最後加入等體積pH7磷酸緩沖液繼續浸泡（磷酸緩沖液用試劑1、2以39:51的比例混合，並用pH計校對）。

2．裝柱 將層析柱下端的止水螺絲旋緊，向柱中加入約5-7cm高的緩沖液，把溶脹好的糊狀凝膠邊攪拌邊到入柱中，同時開啟止水螺絲，控制一定的流速，使柱中的凝膠一直處在溶液中。最好一次連續裝完，若分次裝入，需用玻璃棒輕輕攪動柱床上層凝膠，以免出現界面。裝柱長度至少8cm。最後放入略小於層析柱內徑的濾紙片，以防將來加樣時凝膠被沖起。

3．平衡 用磷酸緩沖液洗脫，平衡20分鍾。注意液面不要低於凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內的流動與最終生物大分子物質的分離效果。

4．血紅蛋白樣品的制備 取1ml抗凝血於燒杯中，加入10ml pH7 20mM磷酸緩沖液，再加入固體鐵氰化鉀，使濃度達到5mg/ml。

5．層析柱還原層的形成 取1ml 40mMFeSO4於小燒杯中，加入1ml 0.2M Na2HPO4,80mM Na2H2EDTA混合液攪拌均勻。待層析柱上緩沖液幾乎全部進入凝膠時，速取該混合液0.4ml加入層析柱中，待混合液完全進入柱床後加入0.7ml緩沖液。（注意還原劑的混合液要新鮮配製，盡可能縮短在空氣中暴露的時間）。

6．上樣 將柱中多餘的液體從底部流出後關閉止水螺絲,取前面制備好的血紅蛋白樣品0.5ml，將樣品溶液小心加到凝膠柱上，打開止水螺絲，使樣品溶液流入柱內。

7．洗脫 用緩沖液進行洗脫，控制緩沖液在約每5秒一滴的流速，觀察並記錄實驗現象。

8．清洗 待所有色帶流出層析柱後，加快流速，繼續清洗層析柱5min