1. 測定蛋白質的構型和功能要用什麼儀器,有哪些步驟
你好,很高興回答你的問題。
構型這個概念是指 一個有機分子中各個原子特有的固定的空間排列。這種排列不經過共價鍵的斷裂和重新形成是不會改變的。構型的改變往往使分子的光學活性發生變化。蛋白質的構型就是一級結構,指其氨基酸排列順序。
測定蛋白質的構型的主要有兩種方法:Edman降解(Edman degradation)和質譜法。
EDMAN降解法測序是經典的方法,通過從多肽鏈游離的N末端(或者C末端,但是很少)測定氨基酸殘基的序列的過程。N末端氨基酸殘基被苯異硫氰酸酯修飾,然後從多肽鏈上切下修飾的殘基,現在一般都是自動測序儀。
質譜法測蛋白只要是利用生物質譜儀,比如ESI-Q-TOF,ESI-IT-Obitraq。利用特異的酶將蛋白切成肽段, 然後通過質譜方法進行測定,產生數據或通過重頭比對,或者通過生物信息學中資料庫搜索的方法推斷出肽段序列,然後再由肽段序列拼接處蛋白序列。這種方法是近些年來隨著蛋白質組學的發展而廣泛被使用,但是對於蛋白完整序列測定需要較強的生物信息學技術。
整體而言, EDMAN降解法准確, 但是耗時長, 而且對於所測定的肽段要求很高, 不能太長, 不能太難修飾等等, 一般能測個20-50鹼基不錯了。而質譜法方法快速,但是准確性比EDMAN降解法略差。
另外,樓主講的蛋白功能測定,不同的蛋白質功能各異,蛋白功能主要通過生物學實驗反復驗證次得到,這個比較復雜,沒有固定的模式,要逐一研究。
另外,像核磁儀可以用來研究蛋白的構象或者說晶體結構,表面等離子共振儀器可以用來研究蛋白蛋白相互作用,等等,蛋白質是未來有限的生物研究資源,現在全世界對蛋白質的研究熱情都很高。也有許多相關的基礎科教書,樓主感興趣可以去看看。
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2. 血液中激活蛋白用什麼實驗方法定量測定
血液中激活蛋白可以用雙縮脲法來定量測定
血液中激活蛋白的肽鍵在鹼性溶液中能與2價銅離子作用生成穩定的紫紅色絡合物。此反應和兩個尿素分子縮合後生成的雙縮脲。
這種紫紅色絡合物在540nm處有明顯吸收峰,吸光度在一定范圍內與血清蛋白含量呈正比關系,經與同樣處理的蛋白質標准液比較,即可求得蛋白質含量。
所以血液中激活蛋白可以用雙縮脲法來定量測定
3. 醫院檢驗科都使用什麼儀器或設備
醫院檢驗科:血球分析儀、尿液分析儀、生化分析儀、血流變儀、發光儀、酶免內儀、糖化血紅蛋白容儀、電解質分析儀、生物安全櫃、離心機、顯微鏡、凈水機、ups、高壓滅菌鍋、醫用冰箱、溫濕度計、計算機、列印機、空調等等。
4. 現在國內檢測蛋白質用什麼方法涉及到哪些化學儀器
目前食品中蛋白質的測定方法有蛋白質自動分析儀,近紅外自動測定儀,紫外分光光度法以及凱氏定氮法等。本文採用納氏試劑作為顯色劑測定食品中蛋白質含量,適用范圍廣,可用於各類食品及保健食品的檢測。用本法對標准品、質控樣品進行測定獲得滿意結果,對批量樣品的快速測定更具有實用性。現將結果報告如下。
材料與方法
儀器與試劑 WFZ800-D3型紫外分光光度計(北京第二光學儀器廠)。分析純硫酸、硫酸銅、硫酸鉀。(1)納氏試劑:稱取碘化汞100g及碘化鉀70g,溶於少量無氨蒸餾水中,將此溶液緩緩傾入己冷卻的32%氫氧化鈉溶液500ml中,並不停攪拌,再用蒸餾水稀釋至1L,貯於棕色瓶中,用橡皮塞塞緊,避光保存。(2)硫酸銨標准儲備溶液(1.0g/L):精確稱取經硫酸乾燥的硫酸銨0.4720g,加水溶解後移入100mL容量瓶中,並稀釋至刻度,混均此液每毫升相當於1.0mgNH3-N(10℃下冰箱內儲存穩定1年以上)。(3)硫酸銨標准使用溶液(0.01g/L):用移液管精密吸取1.0ml標准儲備液(1.0g/L)於100ml容量瓶內,加水稀釋至刻度,混勻,此溶液每毫升相當於10.0μg NH3-N。
方法
標准曲線繪制 取25ml比色管7支,分別准確吸取0.01g/L硫酸銨標准使用液0.00,0.5,1.0,3.0,5.0,7.0,10.0ml(相當於標准0.0,5.0,10.0,30.0,50.0,70.0,100.0μg),加水至10ml刻度,於標准系列管中各加2ml納氏試劑,混勻後放置10min,移入1cm比色皿內,以零管為參比,於波長420mm處測量吸光度,以標准管含量為橫坐標(μg),對應的吸光度(A)值為縱坐標繪制標准曲線。
樣品測定 選擇牛奶和奶粉為檢測樣品。精密稱取樣品0.1~2.0g置於250ml三角瓶中,加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml,先小火加熱,待內容物全部炭化,泡沫停止後,加大火力至液體呈藍色,使H2SO4剩餘量約為3ml左右為止,室溫放冷後,沿瓶壁慢慢加入10ml水,移入100ml容量瓶中,用少量蒸鎦水洗三角瓶3次,洗液全部並入容量瓶中,冷卻,加蒸餾水至刻度,混勻。測定時取0.5ml,加水至10ml刻度,以後操作同標准曲線。同時做空白試驗。
計算公式
X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000
式中:X-試樣中蛋白質含量(g/100g或g/100ml)
C-試樣測定液中扣除空白後氮的含量(μg)
V1-試樣消化液定容體積(ml)
V2-測定用消化液體積(ml)
m-樣品質量(g)或體積(ml)
F-氮換算為蛋白質的系數。
蛋白質的氮含量一般為15%~17.6%,按16%計算乘以6.25即為蛋白質,乳製品為6.38,麵粉為5.7,肉及肉製品為6.25,大豆為5.71。
結果
2.1 測定波長選擇 含氮量為30μg的標准管在顯色後,在波長400~440mm范圍內每間隔5nm進行測定,最大吸收波長為420mm。
顯色劑用量選擇 含氮量為30μg的標准管分別加入不同量的納氏試劑,在420mm的波長下分別測定其吸光度結果。納氏試劑顯色劑加入量為1.5~3.0ml時吸光度基本無變化,本法選擇加入納氏試劑2.0ml。
顯色時間及穩定性 含氮量為30μg的標准管經顯色後,分別在10,30min,1,2,4,8h進行測定。顯色後10min~8h內吸光度穩定無變化。本法選顯色10min後測定。
標准曲線 回歸方程:y=0.016X-1.5×10-3,r=0.9998,最佳線性范圍0.0~100μg。
精密度 牛乳和奶粉2種樣品分別取6份按本法重復測定6次,牛乳和奶粉精密度測定結果:平均數分別為3.06,23.50;標准差分別為±0.029,±0.073;相對標准偏差分別為0.31%,0.94%。
對2種樣品利用標准加入法作回收試驗(表1) 結果可見,回收率為95.50%~99.44%。
2種方法測定結果比較 分別用GB/T5009.5-2003凱氏定氮法與本法測定。結果顯示,2種分析方法的測定結果差異無統計學意義(t=0.026,P>0.05)。
測定標准物質 用本法測定4種不同的蛋白質標准物質,測定結果與標准物質含量一致。
以納氏試劑作為顯色劑快速測定食品中蛋白質的方法特點簡單、快速,適用於批量樣品測定。在鹼性條件下NH3-N與納氏試劑反應生成的黃色化合物穩定。本法與國標凱氏定氮法進行比較t=0.026,P<0.05,n=32,2種方法測定結果無明顯差異。測定范圍廣,線性范圍寬0.0~100.0μg;精密度高;相對標准偏差為0.31%~0.94%;回收率好,加標回標率為95.50%~99.44%。用本法測定標准物質結果一致,用於質量控制樣本測定結果滿意。本法儀器試劑簡單,易於基層普及,有利於推廣應用。
5. 常用的血清蛋白質含量測定方法有哪些
四種血清總蛋白質的測定的方法:
1.基於蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚試劑比色法 由於各種蛋白質分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同,特別是白蛋白含色氨酸為0.2%,而γ-球蛋白中含量達2%-3%,導致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中加入Cu2+,集中原法和雙縮脲反應兩者的作用,使呈色靈敏度提高。其中75%的呈色依賴於Cu2+.反應產物最佳吸收峰在650-750nm,方法靈敏度為雙縮脲方法的100倍左右。有利於檢測較微量的蛋白質。但試劑反應仍易受多種化合物的干擾。
2.紫外測定法 採用280nm和215/225紫外吸收值,計算蛋白質含量280nm 是由於蛋白質分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特異性和准確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有干擾。紫外區200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區域其吸收值為280nm的10-30倍,將血清稀釋1000-2000倍可以消除干擾物質的影響。
3.採用沉澱反應進行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方,此方法甚為簡便,不需特殊儀器,技術關鍵在於:①選擇最佳試劑濃度及溫度;②混勻技術;③選用的標准;④待測標本中的蛋白濃度。
4.染料結合法 蛋白質可與某些染料特異結合,如氨基黑(amino black)與考馬亮藍(comassive brilliant blue )。這一性質除了可以用於電泳後的蛋白質區帶染色,亦可用於總蛋白質的定量。缺點是多種蛋白質與染料的結合力不一致。考馬亮藍在與蛋白質結合後的吸收峰從465nm移向595nm,這一性質可用分光光度法來定量檢測。
6. 血細胞分析儀測定血紅蛋白採用的是
血細胞分析儀測定血紅蛋白採用的是(光電比色法)。
7. 我司測血神器——攜帶型血紅蛋白儀的工作原理
攜帶型血紅蛋白儀,分析儀採用光學反射光度法原理,利用測定試劑片的反射率來檢測血紅蛋白濃度。當配套試劑片按提示插入分析儀後,分析儀會自動檢測空白,然後滴入一滴全血標本至測試孔,經擴散、反應後,該血紅蛋白可在500-600nm 范圍內有吸收光譜。分析儀的光學測定頭會自動檢測膜上反射光的變化,反射光的強度與血紅蛋白濃度成反比,分析儀會在12秒內計算並顯示血紅蛋白的濃度。
8. 血液凝固分析儀檢測原理有哪些
不同類型的血凝儀採用的原理也不同,目前主要採用的檢測方法有:凝固法、底物顯色法、免疫法、乳膠凝集法等。由於在血栓/止血檢驗中最常用的參數,均可用凝固法測量,故目前半自動血凝儀基本上以凝固法測量為主,在全自動血凝儀中,也一定包括凝固法測量方式。
凝固法(生物物理法)
凝固法是通過檢測血漿在凝血激活劑作用下的一系列物理量 (光、電、機械運動等)的變化,再由計算機分析所得數據並將之換算成最終結果,所以也可將其稱作生物物理法。
a.電流法
電流法利用纖維蛋白原無導電性而纖維蛋白具有導電性的特點,將待測樣品作為電路的一部分,根據凝血過程中電路電流的變化來判斷纖維蛋白的形成。但由於電流法的不可靠性及單一性,所以很快被更靈敏、更易擴展的光學法所淘汰。
b. 光學法(比濁法)
光學法血凝儀是根據凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。
根據待驗樣品在凝固過程中光的變化來確定檢測終點的。當向樣品中加入凝血激活劑後,隨著樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程,樣品的光強度逐步增加,儀器把這種光學變化描繪成凝固曲線,當樣品完全凝固以後,光的強度不再變化。通常是把凝固的起始點作為 0%,凝固終點作為100%,把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光的變化,將其轉化為電信號,經過放大再被傳送到監測器上進行處理,描出凝固曲線。
光學法凝血測試的優點在於靈敏度高、儀器結構簡單、易於自動化 ; 缺點是樣品的光學異常、測試杯的光潔度、加樣中的氣泡等都會成為測量的干擾因素。
c.磁珠法
早期的磁珠法是在檢測杯中放入一粒磁珠,與杯外一根鐵磁金屬桿緊貼呈直線狀,標本凝固後,由於纖維蛋白的形成,使磁珠移位而偏離金屬桿,儀器據此檢測出凝固終點,這類儀器也可稱為平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光學法中樣品本底干擾問題,但存在靈敏度低等缺點。
現代磁珠法出現在 20世紀80年代末,90年代初進入商品化。現代磁珠法被稱為雙磁路磁珠法。雙磁路磁珠法的測試原理如下: 測試杯的兩側有一組驅動線圈,它們產生恆定的交變電磁場,使測試杯內特製的去磁小鋼珠保持等幅振盪運動。凝血激活劑加入後,隨著纖維蛋白的產生增多,血漿的粘稠度增加,小鋼珠的運動振幅逐漸減弱,儀器根據另一組測量線圈感應到小鋼珠運動的變化,當運動幅度衰減到50%時確定凝固終點。
底物顯色法(生物化學法)
底物顯色法是通過測定產色底物的吸光度變化來推測所測物質的含量和活性的,該方法又可稱為生物化學法。檢測通道由一個鹵素燈為檢測光源,波長一般為 405nm。探測器與光源呈直線,與比色計相仿。
血凝儀使用產色底物檢測血栓與止血指標的原理是 : 通過人工合成與天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列順序、並還有特定作用位點的小肽,並將可水解產色的化學基因與作用位點的氨基酸相連。測定時由於凝血因子具有蛋白水解酶的活性,它不僅能作用於天然蛋白質肽鏈,也能作用於人工合成的肽鏈底物,從而釋放出產色基因,使溶液呈色。產生顏色的深淺與凝血因子活性成比例關系,故可進行精確的定量。目前人工合成的多肽底物有幾十種,而最常用的是對硝基苯胺(PNA),呈黃色,可用405mm波長進行測定。
免疫學方法
在免疫學方法中以純化的被檢物質為抗原,制備相應的抗體,然後用抗原抗體反應對被檢物進行定性和定量測定。常用方法有 :
a.免疫擴散法。將被檢物與相應抗體在一定介質中結合,測定其沉澱環大小,與標准進行比較,計算待測物濃度。此法操作簡單,不需特殊設備,但耗時過長,靈敏度不高,僅適於含量較高凝血因子檢測。
b.箭電泳。在一定電場中,凝膠支持物內的被檢物與其相應抗體結合形成的一個個「火箭峰」,火箭峰的高度與其含量成正比,通過測定峰高並與標准比較進行定量測定。此法操作復雜,臨床應用較少。
c.雙向免疫電泳。 通過水平與垂直兩個方向進行電泳可將某些分子結構異常的凝血因子進行分離。
d.酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)。用酶標抗原或抗體和被檢物進行抗原結合反應,經過洗滌除去未結合的抗原或抗體及標本中的干擾物質,留下固定在管壁的抗原抗體復合物,然後加入酶的底物和色原性物質,反應產生有色物質,用酶標儀進行測定,顏色深淺與被檢物濃度呈比例關系。該法靈敏度高,特異強,目前已用於許多止血、血栓成分檢測。
e.免疫比濁法。 將被檢物與其相應抗體混合形成復合物,從而產生足夠大的沉澱顆粒,通過透射比濁或散射比濁進行測定。此法操作簡便,准確性好,便於自動化。
9. 都有哪些驗血器材它們各用在什麼樣的驗血類型中
1.血細胞分析儀:血細胞分析(血常規)
2.半自動/全自動生化分析儀:生化檢驗(如:肝功能、腎功能、血糖血脂...)
3.電解質分析儀:電解質檢測:鉀、鈉、氯、鈣
4.血凝儀:血凝項目:PT、APTT、TT、FBI...
5.酶標儀:免疫定性/半定量檢測:乙肝兩對半、丙肝抗體、HIV抗體...
6.化學發光分析儀:免疫定量:T3、T4、TSH、激素、腫瘤標志物等...
7.放射免疫分析儀:同上,因為有放射性廢棄物,已逐漸被化學發光免疫分析儀取代。
8.血氣分析儀:血氣分析:氧分壓、二氧化碳分壓
9.血液椎板粘度儀:血流變:高、中、低全血/血漿粘度。
10.PH計:血液酸鹼度:大部分血氣分析儀也有此功能
11.血沉儀:用於血沉測定,比手工法多一項血沉方程系數
12.血糖儀:用於急診末梢血糖檢測
13.免疫比濁儀:用於免疫項目檢測:ASO、RF、CRP、IG(G、D、E、M、A)、C3、C4...
15.電泳儀、分光光度掃描儀:用於:血清蛋白電泳、血紅蛋白電泳、同功酶分析...
16.基因擴增儀、電泳儀、時間分辨熒光分析儀:分子生物學診斷:乙肝DNA檢測、親子鑒定等
17.原子吸收分光光度計:微量元素檢測
...
其他廠用儀器設備:
顯微鏡:血細胞分析
離心機: 分離血清
水浴箱:模擬人體37度環境
培養箱:血液細菌培養、細胞培養
...
10. 伊鴻健康血液細胞分析儀是什麼有什麼用途
伊鴻健康血液細胞分析儀是什麼?有什麼用途?從這個儀器的名稱就可以判斷出這是一個醫療用的。血液分析儀器設備是做血液分析用途使用的。