Ⅰ 薄層色譜法起源及使用是什麼
薄層色譜法起源於60年代,至今,它已成為一般實驗室必不可少的分離分析手段,常常被首選成不可替代的方法。
薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用於少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在製作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精製樣品,此法特別適用於揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的質。此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種「預試」。
薄層色譜法,系將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點樣、展開後,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行葯品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。
玻板 除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑、平整,洗凈後不附水珠,晾乾。
固定相或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF<[254]> 、硅膠H、 硅膠HF<[254]>,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。 其顆粒大小,一般要求直徑為10~40μm。薄層塗布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接塗布於玻璃板上, 後者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時),混勻後加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5~0.7%)適量調成糊狀,均勻塗布於玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。
塗布器 應能使固定相或載體在玻璃板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
點樣器 同紙色譜法項下。
展開室 應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,並有嚴密的蓋子,除另有規定外,底部應平整光滑,應便於觀察。
薄層板制備 除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡後,倒入塗布器中,在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布(厚度為0.2~0.3mm),取下塗好薄層的玻板,置水平台上於室溫下晾乾,後在110℃烘30分鍾,即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
點樣 除另有規定外,用點樣器點樣於薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
展開 展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡或按正文規定操作。 將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規定距離(一般為10~15cm),取出薄層板,晾乾,按各品種項下的規定檢測。
如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。 薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明,結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描,進行比較並計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。希望能幫到您!
Ⅱ 薄層色譜法的操作
除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡後,倒入塗布器中,在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布(厚度為0.2~0.3mm),取下塗好薄層的玻板,置水平台上於室溫下晾乾,後在110℃烘30分鍾,即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板倆種。
常用吸附劑的基本情況:顆粒的大小,太大洗脫劑流速快分離效果不好,太細溶液流速太慢。一般說來吸附性強的顆粒稍大,吸附性弱的顆粒稍小。氧化鋁一般在100-150目。氧化鋁分為鹼性氧化鋁,適用於碳氫化合物、生物鹼及鹼性化合物的分離,一般適用於PH為9-10的環境。中性氧化鋁適用於醛、酮、醌、酯等PH約為7.5的中性物質的分離。酸性氧化鋁適用於PH4~4.5的酸性有機酸類的分離。氧化鋁、硅膠根據活性分為五個級,一級活性最高,五級最低。
黏合劑及添加劑:為了使固定相(吸附劑)牢固地附著在載板上以增加薄層的機械強度,有利於操作,需要時在吸附劑中加入合適的黏合劑:有時為了特殊的分離或檢出需要,要在固定相中加入某些添加劑。
薄層板的活化:硅膠板於105-110℃烘30分鍾,氧化鋁板於150-160℃烘4小時,可得活性的薄層板。 除另有規定外,用點樣器點樣於薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
點樣直徑不超過5mm,點樣距離一般為1~1.5cm即可。
樣品在溶劑中的溶解度很大,原點將呈空心環——環形色譜效應。因此配製樣品溶液時應選擇對組分溶解度相對較小的溶劑。
點樣方式有點狀點樣和帶狀點樣。
展開劑也稱溶劑系統,流動性或洗脫劑,是在平面色譜中用作流動相的液體。展開劑的主要任務是溶解被分離的物質,在吸附劑薄層上轉移被分離物質,使各組分的Rf值在0.2~0.8之間並對被分離物質要有適當的選擇性。作為展開劑的溶劑應滿足以下要求:適當的純度、適當的穩定性、低黏度 、線性分配等溫線、很低或很高的蒸氣壓以及盡可能低的毒性。
展開方式總的來講平面色譜的展開有線性、環形及向心3種幾何形式。
A 單次展開 用同一種展開劑一個方向展開一次,這種方式在平面色譜中應用最為廣泛。(垂直上行展開,垂直下行展開,一向水平展開,對向水平展開)
B 多次展開 單向對此展開,用相同的展開劑沿同一方向進行相同距離的重復展開,直至分離滿意,廣泛應用於薄層色譜法
C 雙向展開 用於成分較多、性質比較接近的難分離組分的分離。
薄層展開室需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規定距離(一般為10~15cm),取出薄層板,晾乾,按各品種項下的規定檢測。
影響展開的因素
A 相對濕度的影響
B溶劑蒸汽的影響(a 展開室的飽和b預吸附)
C 溫度的影響
D 展距的影響與分離度僅正比與展距的平方根。 A 光學檢出法
a自然光(400~800nm)
b紫外光(254nm或365nm)
c熒光一些化合物吸收了較短波長的光,在瞬間發射出比照射光波長更長的光,而在紙或薄層上顯出不同顏色的熒光斑點(靈敏度高、專屬性高)
B 蒸汽顯色法
多數有機化合物吸附碘蒸氣後顯示不同程度的黃褐色斑點,這種反應有可逆及不可逆兩種情況,前者在離開碘蒸氣後,黃褐色斑點逐漸消退,並且不會改變化合物的性質,且靈敏度也很高,故是定位時常用的方法;後者是由於化合物被碘蒸氣氧化、脫氫增強了共軛體系,因此在紫外光下可以發出強烈而穩定的熒光,對定性及定量都非常有利,但是制備薄層時要注意被分離的化合物是否改變了原來的性質。
C 物理顯色法
用紫外照射分離後的紙或薄層後,使化合物產生光加成,光分解、光氧化還原及光異構等光化學反應,導致物質結構發生某些變化,如形成熒光發射功能團。發生熒光增強或淬滅及熒光物質的激發或發射波長發生移動等現象,從而提高了分析的靈敏度和選擇性。
D 試劑顯色法
廣泛應用的定位方法。用於紙色譜的顯色劑一般都適用於薄層色譜,還有防腐劑的顯色劑不適合用於紙色譜及含有有機黏合劑薄層的顯色,又時噴顯色劑後續加熱,這也不是用於紙色譜。
顯色方法a噴霧顯色:顯色劑溶液以氣溶膠的形式均勻的噴灑在紙和薄層。b 浸漬顯色:揮去展開劑的薄層板,垂直的插入盛有展開劑的浸漬槽中,設定浸板及抽出速度和規定在顯色劑中浸漬的時間。
顯色試劑
a 通用顯色劑硫酸溶液(硫酸:水 1:1,硫酸:乙醇1:1)、0.5%碘的氯仿溶液、中性0.05%高錳酸鉀溶液、鹼性高錳酸鉀溶液(還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色斑點)
b 專屬顯色劑
⑸測定比移值
在一定的色譜條件下,特定化合物的Rf值是一個常數,因此有可能根據化合物的Rf值鑒定化合物。
⑹ 薄層掃描
薄層掃描法指用一定波長的光照射在經薄層層析後的層析板上,對具有吸收或能產生熒光的層析斑點進行掃描,用反射法或透射法測定吸收的強度,以檢測層析譜。對於中成葯復方制劑,亦可用相應的原葯材按需要組合作陰、陽對照,然後比較其薄層掃描圖譜加以鑒別。使用儀器為薄層掃描儀。
如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明,結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描,進行比較並計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。

Ⅲ 薄層色譜系統有哪些組成各系統的功能及儀器名稱
薄層色譜儀器有很多的,簡單來說有
1.點樣儀,點樣用的
2.展開儀,展開時候用的,比岑層析缸自動化程度要高很多;
3.定量就用掃描儀了,這個就不用說了
4.定性就用成像儀器了
5.要是需要衍生化的話就需要用到噴霧器啊加熱器什麼的
Ⅳ 薄層層析板在點樣與展板時有哪些注意事項
點樣
盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性,最好只用1微升的點樣管。這樣,點的斑點較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹乾或放入乾燥器里晾乾。
展開劑配製
選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配製展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑,會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例准確度對不同的分析任務有不同的要求,盡量達到實驗室儀器的最高精確度,比如:取1ml的溶劑,應使用1ml的單標移液管,移液管應符合計量認證要求,盡管多數時候這不是必須的。
Ⅳ 薄層色譜手動點樣的主要器具有哪些
點樣管,定量點樣管
Ⅵ 哪個廠家生產性價比高的薄層色譜葯物分析儀器,如 薄層掃描儀,成像儀,薄層衍生化設備等,一定耐用才好
我知道性價比好的只有兩家,一個是武漢葯科,網路公司名即可看見。一個是上海科者。個人感覺武漢葯科更好,你需要的薄層色譜儀器他都有,無論是醫用 ,還是葯用。
紫外線檢測,成像儀系列 成像掃描儀 三用紫外線分析儀、薄層色譜掃描儀 。
Ⅶ 薄層色譜掃描儀有什麼用途(急!!!)
薄層色譜掃描儀:主要是對薄層上被分離物質進行直接定量的儀器。現在一般使用雙波長色譜掃描儀,如日本的CS-900,CS-910等,雙波長色譜掃描儀,不僅適合測定透射光而且也可以測定反射光,而對薄層厚度,透射能力要求就不那麼嚴格。這種儀器還有熒光附件,也可以對熒光物質進行測定。
薄層色譜特點是簡單,迅速,靈敏度高,可同時分析多個式樣,分離效果好,式樣予處理要求低。主要用於糧油食品分析,如:在食品營養素,農葯殘留物,污染物,食品添加劑,無機化合物,有機化合物生物鹼等的分離分析。
Ⅷ 薄層色譜法的儀器與材料
⑴載板
用以塗布薄層用的載板有玻璃板、鋁箔及塑料板,對薄層板的要求是:需要有一定的機械強度及化學惰性,且厚度均勻、表面平整,因此玻璃板是最常用的。載板可以有不同規格,但最大不得超過20×20,玻璃板在使用前必須洗凈、乾燥備用。玻板除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑、平整,洗凈後不附水珠,晾乾。
⑵固定相(吸附劑)或載體
薄層層析硅膠薄層層析硅膠最常用的有硅膠G、硅膠GF〈[254]〉、硅膠H、硅膠HF〈[254]〉,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F〈[254]〉等。其顆粒大小,一般要求直徑為10~40μm。薄層塗布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接塗布於玻璃板上,後者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時),混勻後加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5~0.7%)適量調成糊狀,均勻塗布於玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。
⑶ 塗布器
應能使固定相或載體在玻璃板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
⑷ 點樣器
定性:內徑為0.5mm管口平整的普通毛細管。
定量:微量注射劑。
點樣直徑不超過4mm,點樣距離一般為1~1.5cm即可。
⑸ 展開室
應使用適合載板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,並有嚴密的蓋子,除另有規定外,底部應平整光滑,應便於觀察。

Ⅸ 什麼叫薄層色譜法原理是什麼!!急!!
一、薄層色譜法
薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法,它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同,使在流動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中,連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,從而達到各成分的互相分離的目的。
二、薄層色譜法的基本原理
例如用硅膠和氧化鋁作支持劑,其主要原理是吸附力與分配系數的不同,使混合物得以分離。當溶劑沿著吸附劑移動時,帶著樣品中的各組分一起移動,同時發生連續吸附與解吸作用以及反復分配作用。
由於各組分在溶劑中的溶解度不同,以及吸附劑對它們的吸附能力的差異,最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標準的化合物在層析薄板上一起展開,則可以根據這些已知化合物的Rf值(後面介紹Rf值)對各斑點的組分進行鑒定,同時也可以進一步採用某些方法加以定量。

(9)薄層點樣用什麼樣的儀器擴展閱讀:
薄層色譜法(TLC)薄層色譜具有選用范圍廣,重現性好等優點,常用於中葯各種成分的鑒別。
用固定波長對薄層展開的各斑點作薄層掃描圖譜比目測的層析圖譜更為客觀准確,因而具有更好的指紋鑒別意義。但由於受薄層板的質量和開放式層析系統等外界因素的影響,易引起一定的實驗誤差。
薄層色譜法與紙層析和紙層析比較TLC快速、分離效率高、靈敏度高、顯色方法多樣、圖像易保存。