沒有WB曝光儀器怎麼看蛋白膠

① 文獻中常有western blot和免疫沉澱結合在一起做的圖，可是在下看不同，請幫忙看看這種圖怎麼看呀

圖頂部的「+」和「-」分別代表是否表達載體蛋白以及載體蛋白的相關信息；

有什麼不懂的還可以問我，謝謝！

② 請教下跑蛋白膠膠的濃度根據什麼定的，我們實驗室用的是8%-12%的膠，但具體怎麼選不知道

這個要看你蛋白大小的，個人習慣：蛋白如果100kD以上的話用8%，100-60用10%，60-40用12%，40-10用15%，分子克隆上面有的，每個濃度大概跑什麼大小的蛋白質。

③ 試分析如何進給你層析柱和凝膠而沒有核酸蛋白檢測儀和部分收集器也沒有記錄儀該怎麼完成

去買個紫外燈照下試試看，一般的核酸蛋白對紫外線會有強吸收，核酸蛋白的峰會呈現黑色，你可以根據黑色帶的移動，來判斷分離情況。

④ 蛋白膠怎麼看是否表達

對比空白對照，找空白里沒有的條帶

⑤ 做Western時如何判斷蛋白是否降解

恩。。
如果蛋白樣品比較多。。。
可以將電泳後的膠用考馬斯亮藍染色
觀察染色後膠上的條帶形狀以判斷蛋白降解情況。
如果蛋白樣品比較稀少
也可以經電泳、轉膜後將膠進行考馬斯亮藍染色
觀察未轉膜的其他分子量蛋白的條帶分布情況作判斷。

⑥ 關於小分子蛋白的Western-blot問題，實驗時的膠濃度，電壓，轉膜條件等等

我最小也只做過十幾KD的。但是根據原理呢主要有以下注意事項：

1。當然是膠的濃度。9kda的話要適當增大，15-20%應該差不多吧。如果實在不行還能考慮用gradient gel。

2。二是轉膜緩沖液，內要含20%甲醇，新鮮配製，反復使用的話注意甲醇會蒸發掉。如果連續使用的話兩三次應該還可以。甲醇一是能夠洗掉跑膠時泡透了的SDS(SDS使蛋白帶負電，方便移動)，二是幫助蛋白固定到膜上面。它同時有收縮膠的孔徑的副作用，但對小分子無影響。
3。三是膜的孔徑。很多常規的膜孔徑為0.45um。你如果做小分子，17kd以下都跑掉了，那你應該試試0.2um孔徑的膜。有一個小訣竅是轉膜時疊兩張膜一起轉，如果小分子蛋白跑過了前面一張膜，那總還有可能被後面一張膜抓到。
4。四是轉膜時間。小分子的話就不要過夜轉，採取100V一小時應該就可以了，注意降溫。

⑦ 做western blot時為什麼轉膜後膜上沒有蛋白

只看marker也不可靠吧？還是用ponseau S （麗春紅）給膜上的蛋白質顯色看一下到底如何。 另外膜上沒有marker的話，膠上還看得到marker嗎？如果還在膠上，那麼蛋白質可能也還在膠上，可以改變電流和時間重做一遍。 如果膠上膜上都沒有

⑧ 怎麼看蛋白質電泳分析結果圖，以及它的原理是什麼

雙向電泳就是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合。
1.先進行等電聚焦電泳（按照蛋白等電點pI分離）：在膠中加入雙性電解質溶液，加上電場後建立穩定PH梯度，蛋白質溶液加入後建立電場，蛋白以不同PI分離開來。
2.然後再進行SDS-PAGE（按照分子大小）：將上一步的膠加上橫向電場，同一PI中聚集的蛋白，由於分子量不同而分開。
經染色（一般是銀染）得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。
二維電泳使用於蛋白組學研究，對大批量蛋白篩選鑒定中存在很大優勢，通過不同膠做對比，把不同處的膠割出來單獨鑒定。

⑨ 蛋白質電泳條帶怎麼看

蛋白質電泳條帶怎麼看
不能嚴格定量，只能互相比較。 無論什麼染色法，條帶亮度會隨著染液多少及染色時間的不同而變化，無法嚴格定量。 page的作用更多的是看目的條帶的大小，以及兩個樣品中相同蛋白互相比較多少。不能精確算出是多少ug或ng。
1.直接將帶條帶的凝膠放在 凝膠呈像系統 中進行定量分析.
2.將所需要的條帶剪切下來,用X體積蒸餾水溶解,通過紫外分光光度計在280nm條件下,測定吸光度A值.根據儀器目前標准曲線計算蛋白質濃度,與蒸餾水體積X相乘,得到蛋白質質量.
3.如果樣品中含有熒光成分,可以進行熒光分析.

⑩ wb實驗蛋白需要跑出膠嗎

需要，最多需要配4塊膠,每塊膠檢測3-4種不同分子量的蛋白。