色譜儀器方法怎麼找

Ⅰ 氣相色譜儀的使用步驟

北京北分天普氣相色譜儀TP-2060

有具體氣象色譜技術參數；

1.打開氮氣、氫氣、空氣發專生器的屬電源開關（或氮氣鋼瓶總閥），調整輸出壓力穩定在

0.4Mpa左右（氣體發生器一般在出廠時已調整好，不用再調整）。

2.打開色譜儀氣體凈化器的氮氣開關轉到「開」的位置。注意觀察色譜儀載氣B的柱前壓上升並

穩定大約5分鍾後，打開色譜儀的電源開關。

3.設置各工作部溫度。

4.點火：待檢測器（按「顯示、換擋、檢測器」可查看檢測器溫度）溫度升到100℃以上後，打開凈化器上的。

5.氫氣、空氣開關閥到「開」的位置。

6.打開電腦及工作站A，打開一個方法文件：TVOC分析方法或苯分析方法。

7.關機程序：首先關閉氫氣和空氣氣源，使氫火焰檢測器滅火。

8.使用熱解吸儀分析標准樣品。

9.樣品分析。

（a）TVOC分析時：首先把解析儀的溫度設置為300℃，把六通閥的開關置於反吹位置，固定好已經採集了現場樣品的熱解析管。

（b）苯分析時：首先把解析管移到加熱爐內加熱，同時開始計時。

Ⅱ 液相色譜儀使用步驟

高效液相色譜儀的使用

1.色譜柱它包括空柱和填料。空柱是內壁拋光的不銹鋼管，內徑為4～5mm，長～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直後可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇：水(83：17)為流動相測定柱效及分離度塔板數在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個 50mm長，4~5mm內徑，裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護柱(預柱)接在主柱之前，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經，以洗去鹽類、酸鹼等雜質防止柱生銹及填料中雜質的積聚，再用甲醇流經洗滌使色譜柱獲得再生。

2.流動相的洗脫方式配好經脫氣的流動相放於貯液瓶中，經過有濾過頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱，最後自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恆溶劑脫洗法(isocratic dlution)，即自洗脫開始到結束，溶劑的配比恆定。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，從而使同一個試樣中組分性質相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用於分子排阻色譜及用電化學檢測的反相高效液相色譜法中。

3.檢測器適用於血葯濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發射和電化學三種。紫外檢測器應用於對紫外光有吸收的葯物，大多數葯物分子對紫外光有吸收，故能較普遍採用，檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現性較好。熒光發射檢測器對能產生熒光的葯物才能使用。80年代應用激光替代氙燈光源，光強度增加了3~4倍，對某些葯物的檢測限可達pg級。電化學檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用於檢測兒茶酚胺類及有酚類基團的各種葯物和代謝物。流出組分進入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產生電流，放大後檢測，檢測限pg級。

4.數據處理現代高效液相色譜儀帶有數據處理系統，除記錄譜外，還能自動記錄峰的保留時間，能自動積分求算峰面積，並能按照預定的程序作有關計算，報告分析結果。

高效液相色譜儀使用過程中常見問題及其解決方法

1 液相色譜儀系統

液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱、柱溫箱、檢測器、數據處理系統組成(如圖1所示)。對於整個系統而言，柱子、泵和檢測器是核心部件，同時也是容易出事故的主要場所。

2 常見問題及解決方法

2.1 針對柱壓問題(表1)

柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩定並不是指壓力值穩定於一個恆定值，而是指壓力波動范圍在50PSI之間。壓力過高、過低及波動較大都屬於柱壓問題，但柱壓的高低與色譜柱的種類、品牌、液相系統本身及使用的流動相種類相聯系。值得注意的是在使用梯度洗脫時，進柱壓的平穩緩慢的變化是允許的。

在實際應用中柱壓過高可從以下幾個方面來考慮[1]。首先考慮柱子是否被堵，此時可更換一根新柱子進行檢測。

2.2 針對保留時間漂移的問題 [2，3] (表2)

保留時間的改變是很多液相色譜使用者常碰到的問題，其包括了保留時間增大和減小。它的產生與很多原因有關。

2.3 針對異常色譜峰問題[2-4]

異常的色譜峰指的是色譜圖中無峰或出現負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。具體情況與原因分析如表3。

3 高效液相色譜儀的保養[5-7]

3.1 HPLC的日常操作條件

工作溫度10～30℃; 相對濕度<80%; 最好是恆溫、恆濕，遠離高電干擾、高振動設備。

3.2 泵的保養

使用流動相盡量要清潔;進液處的沙芯過濾頭要經常清洗;流動相交換時要防止沉澱;避免泵內堵塞或有氣泡。

3.3 進樣器的保養

每次分析結束後，要反復沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染。

3.4 柱的保養

柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動;當柱子和色譜儀連接時，閥件或管路一定要清洗干凈;要注意流動相的脫氣; 避免使用高粘度的溶劑作為流動相;進樣樣品要提純;嚴格控制進樣量;每天分析工作結束後，要清洗進樣閥中殘留的樣品;每天分析測定結束後，都要用適當的溶劑來清洗柱;若分析柱長期不使用，應用適當有機溶劑保存並封閉。

3.5 檢測器(UV)的保養

紫外燈的保養要在分析前、柱平衡得差不多時，打開檢測器;在分析完成後，馬上關閉檢測器。同時樣品池要保養。

4 結語

在高效液相色譜使用過程中故障排出時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，從而確定假定因素與問題之間的聯系;如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，從而避免浪費;養成良好的記錄習慣，一個良好的記錄是成功地進行故障排除的關鍵。

總之，在使用高效液相色譜時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養，儀器系統的干凈是用好儀器和維護維修儀器的關鍵。

建議您可以到行業內專業的網站進行交流學習！

分析測試網路網樂意為你解答實驗中碰到的各種問題，基本上問題都能得到解答，有問題可去那提問，網路上搜下就有。

Ⅲ 如何操作高效液相色譜儀

這個沒辦法具體回答。因為不同的儀器品牌，不同的工作站操作方法都是不同的。

簡單地說，液相分為幾個部件，這張圖是安捷倫的液相，從上到下的順序就是：流動相→泵→進樣系統→色譜柱→檢測器→廢液

1.操作的時候，就是把儀器打開，電腦打開，並且在電腦上打開工作站。工作站就相當於一個軟體，它會自動和儀器連接。

2.然後在工作站裡面設置程序，比如，流動相比例啊，流速啊，檢測波長了。然後運行儀器。

3.儀器穩定之後，配樣，同樣設置程序，進樣量，進樣瓶等等，然後進樣分析。

4.這個時候儀器會採集信號，自動出圖。

5.結束之後就可以停止儀器，然後關機了。

Ⅳ 常用的色譜儀器有哪兩大類，各自有何特點

色譜儀器分為氣相色譜和液相色譜，還有氣相色譜質譜聯用儀等；

[檢測家全新機租賃]賽默飛/氣質聯用ISQ7000

檢測家提供新機租賃業務，為您提供實驗室一站式服務，解決實驗成本高、快速擴項難等問題；

[檢測家全新機租賃] 液相色譜 Waters e2695

那麼，高效液相色譜儀（HPLC,）如何選型？

高效液相色譜儀的選型，歸結起來就是2個問題：如何確定高效液相色譜儀的配置？如何選擇高效液相色譜儀的品牌？

今天我們就來談談第一問題，如何確定高效液相色譜儀的配置？

高效液相色譜儀可以分為5大部分：高壓輸液泵單元、進樣器單元、分離單元、檢測器單元、色譜數據處理單元，下面我們來逐一分析，談談高效液相色譜儀的選型細則。

1、高壓輸液泵單元的配置選型：

高效液相色譜儀的高壓輸液方式分為等度方式、梯度方式兩大類別。

等度方式：在色譜分析過程中，流動相中各個組分的比例不隨時間發生變化，例如某次分析過程中流動相中甲醇與水的比例是50：50一直保持不變，那麼這種就叫做等度方式。

梯度方式：在色譜分析過程中，流動相中各個組分的比例隨時間發生發生變化，例如某次分析過程中，隨著時間的推移，流動相中其中一種（或幾種）溶劑比例逐漸增大、另一種或幾種溶劑的比例逐漸減少，最終那麼這種輸液方式就叫做梯度方式。

相應以上2種流動相輸液方式，有等度泵和梯度泵這兩種配置方式。

等度泵：一般採用單泵來作為高壓輸液泵單元，這是一種最簡單最經濟的配置方式。

梯度泵：又分為高壓梯度、低壓梯度。

高壓梯度：常用的是二元高壓梯度泵，也有三元高壓梯度泵；我們通常所說的雙泵，就是指「二元高壓梯度泵」。有幾元高壓，則必須有幾台泵；高壓梯度泵單元，除了幾台高壓泵之外，還需要有配套的流動相混合裝置（通常採用混合器）；由於是高壓混合的梯度方式，所以通常不太會產生氣泡，脫氣機通常可以不用配備。

低壓梯度：與高壓梯度「有幾元高壓就用幾台泵」所不同的是，低壓梯度只需要一台高壓泵，但是在高壓泵的前端，需要加上比例閥（有的公司稱為低壓梯度單元），通過比例閥來調節幾種不同流動相進入高壓泵的比例，從而實現梯度淋洗。因為低壓下各種不同溶劑混合時可能產生吸熱或放熱，所以對於低壓梯度泵單元來說，流動相脫氣機與混合器一樣，都是必不可少的。

高效液相色譜儀（HPLC）的高壓輸液泵單元的選型，主要是根據所檢測項目方法的所需來定，方法中流動相輸液是等度方式，那麼等度泵（單泵）即可滿足需求；如果方法中規定需要用到梯度淋洗輸液方式，那麼就需要選擇梯度泵了。

在一些有HPLC分析方法開發任務的單位，為了滿足將來可能的方法開發需要，即便暫時不需要梯度泵，也往往會配備梯度泵以利拓展方法。

2、進樣器單元的配置選型

高效液相色譜儀（HPLC）的進樣器單元，有2種配置可供選擇：手動進樣器、自動進樣器。

手動進樣器：無論是國產還是進口大牌，例如沃特世（Waters）、島津（Shimadzu）、安捷倫（Agilent），世界上絕大多數公司均採用美國Rheodyne公司生產的六通進樣閥作為高效液相色譜儀的手動進樣閥。

自動進樣器：自動進樣器的最大優點就是，能極大的提高設備使用效率、減少人力成本。例如一個公司的HPLC使用部門，可以在下午下班之前，把未做完的50個樣品都放進自動進樣器內，然後設定分析程序、儀器清洗程序、關機程序，然後所有的人都可以下班，無需派人值守，第二天早上列印圖譜、上報數據即可。

3、分離單元（高效液相色譜柱）

色譜柱是高效液相色譜儀的核心部件。

色譜法最核心的機制就是把樣品中各個組分進行有效分離，而實現分離靠的就是色譜柱。

色譜柱選擇時需要考慮四大參數：固定相類型（填料種類）、柱長、柱內徑、填料粒度。

固定相類型：目前主要有硅膠基質的ODS(碳十八)、氨基、氰基、苯基、硅膠等色譜柱，以及高分子聚合物的固定相填料。目前ODS(碳十八)應用最為廣泛，高效液相色譜法大約有80%分離採用的就是ODS(碳十八)填料。

柱長：色譜柱的長度越長，分離效果越好，但是背壓也就越大、柱子價格就會越貴。目前柱長應用較多的是375px、500px、625px這三個長度，尤其以625px最多。

柱內徑：其它幾個柱參數不變的情況下，高效液相色譜柱的內徑越小，分離度越好（分離度越高），但是柱負載量越小。常用柱內徑是3.9mm、4.6mm、6.0mm，尤其以4.6mm為最常用。

填料粒徑：根據色譜法的速率理論，填料粒徑越小，分離效果越好；但是填料粒度越小，在同樣的流動相輸送流速下，對於高效色譜儀高壓泵的背壓也就越大，對於高壓泵的加壓能力、密封性能也就要求越高。高效液相色譜儀一般採用3微米、5微米或10微米的填料粒徑，而3微米以下粒徑的填料，通常應用於超高效液相色譜儀。高效液相色譜法應用最多的是5微米粒徑的填料。

分離單元還有另外兩個問題需要掂量：是否需要配預柱（保護柱）、是否需要配柱溫箱。

預柱（保護柱）：預柱（保護柱）的存在，會加大色譜死體積，會降低柱效，所以除非樣品特別臟、或有特別多的高分子物質會堵塞分析柱，否則盡量不用預柱（保護柱）。

柱溫箱：因為高效液相色譜法對於溫度的些微波動並不特別敏感，除了一些對於柱溫穩定性要求特別高的分離，高效液相色譜法很多情況下並不需要配置柱溫箱。當然，如果采購預算足夠多，安裝柱溫箱確實能有更好的色譜出峰時間重復性。

4、檢測器單元的配置選型

高效液相色譜儀的檢測器有很多種，最常見的是紫外檢測器，還有示差檢測器、熒光檢測器、二極體陣列檢測器、蒸發光散射檢測器等等。

紫外檢測器：是一種選擇性檢測器，幾乎是所有HPLC檢測器裡面價格最便宜、應用最廣泛的一種檢測器，適合於測定有紫外吸收的物質（帶苯環、雜環、雙鍵叄鍵的物質）。紫外檢測器的特點是靈敏度很高、適用性很廣泛。

示差檢測器：是一種通用型檢測器，但是它的靈敏度低於紫外檢測器，而且它對於流速比較敏感。示差檢測器主要用來對一些沒有紫外吸收的物質進行檢測，例如糖類、高分子聚合物等等。

熒光檢測器：僅僅適合於在紫外光照射下能發射熒光的物質，例如維生素A、維生素D、黃麴黴毒素等檢測。高效液相色譜儀的熒光檢測器的特點是靈敏度高、但適用范圍較窄。

二極體陣列檢測器：是紫外檢測器的一個變種，二極體陣列檢測器的特點是靈敏度較紫外檢測器低、但是能做三維圖譜，特別適合於醫葯研發類的應用。

蒸發光散射檢測器：蒸發光散射檢測器是一種新型的通用型檢測器，未來的趨勢是可以替代示差檢測器等來檢測無紫外吸收的物質，但是目前價格非常昂貴。

5、色譜數據處理單元

高效液相色譜儀的色譜數據處理單元，有數據處理機和色譜工作站兩種，隨著電腦的普及與應用，色譜數據處理機已經漸漸被淘汰，目前以色譜工作站為主流。

色譜工作站又分為可否反控兩大類。

可反控工作站：不但能記錄與處理色譜數據，而且可以反控高效液相色譜儀的各個組成單元。因為一些控制指令介面與數據傳輸的技術性問題，可反控工作站一般是各大儀器廠商自行研發與設計的，互相之間不能通用。

不可反控工作站：僅能記錄與處理色譜數據，不可反控高效液相色譜儀。不可反控工作站通常是外掛式的，包含硬體和軟體兩大部分，硬體部分主要是一個A/D轉換器，將高效液相色譜儀傳輸來的模擬信號轉換成數字信號，再輸進計算機；軟體部分主要功能就是把硬體傳輸來的數字信號轉換成圖譜並進行積分計算等操作。

不可反控工作站的優點是通用性強，但是不可反控儀器、不便進行自動化操作。

二極體陣列檢測器必須要用特殊的三維色譜軟體。

綜上所述，搞清楚了高效液相色譜儀的高壓輸液泵單元、進樣器單元、分離單元、檢測器單元、色譜數據處理單元的選型考量細則，那麼我們才可以在盡量節約經費的情況下，選到我們所需要的儀器配置了。

Ⅳ 高效液相色譜儀操作具體方法

現在的HPLC儀器操作，主要是工作站上體現，要知道是哪個公司的HPLC 用的是什麼工作站才行，
前期主要就是泵的排空，換色譜柱
後面是前處理的過程，根據檢測的物質不同，來決定用什麼樣的前處理條件，和儀器
要是想學HPLC的操作，最好針對的選擇某種型號的來學習，

Ⅵ 氣相色譜儀該怎麼操作

氣相色譜儀的操作方法：

1、加熱

由於氣相色譜儀的生產廠家和質量的不同．測定溫度的方式也不相同對於用微機設數法或撥輪選擇法給定溫度．一般是直接設數或選擇合適給定溫度值加以升溫．而如果是採用旋鈕定位法．則有技巧可言

過溫定位法

將溫控旋鈕調至低於操作溫度約30℃處給氣相色譜儀升溫當過溫至約為操作溫度時．配台溫度指示和加熱指示燈．再逐漸將溫控旋鈕調至台適位置

分步遞進定位法

將溫控旋鈕朝升溫方向轉動一個角度．升溫開始．指示燈亮：當溫度基本穩定時再同向轉動溫控旋鈕．開始繼續升溫：如此遞進調節、直至恆溫在工作溫度上.

2.調池平衡

調池平衡實際是調熱導電橋平衡．使之有較為台適的輸出講調節技巧．其實是對具有池平衡、調零和記錄調零等

第一步．用池平衡或調零旋鈕將記錄儀指針調至台適位置；

第二步．自衰減至l6倍左右．觀察記錄儀指針移動情況；

第三步．用記錄謂零旋鈕將記錄儀指針調回原處；

第四步．退回衰減．觀察記錄儀指針移動情況；

第五步．用調零或池平衡旋鈕將記錄儀指針調回原處

3.點火氫焰氣相色譜儀開機時需要點火．有時因各種原因致使熄火後．也需要點火然而．我們經常會遇到點火不著的情況下面介紹兩種點火技巧．

一、加大氫氣流量法先加大氫氣流量．點著火後．再緩慢調回工作狀況此法通用

二、減少尾吹氣流量法先減少尾吹氣流量．點著火後．再調回工作狀況此法適用於用氫氣怍載氣．用空氣作助燃氣和尾畋氣情況

4、氣比的調節

氫焰氣相色譜儀三氣的流量比．有關資料均建議為：氮氣：氫氣：空氣：l：l：10但由於轉子流量計指示流量的不準確性．事實上誰會去苛求這個配比呢?本人認為為各氣旌以良好匹配．目的是既有高的檢測器靈敏度又能有較好的分離效果．還不致於容易熄火。本著上述原則氣比應按下法調節：

(1）氮氣流量的調節

在色譜柱條件確定後、樣品組分分離效果的好壞、氮氣的流量大小是決定因素調節氮氣流量時．要進樣觀察組分分離情況．直至氮氣流量盡可能大且樣品組分有較好分離為止

(2)氫氣和空氣流量的調節氫氣和空氣流量的調節效果．可以用基流的大小來檢驗先調節氫氣流量使之約等於氮氣?的流量．再調節空氣流量在調節空氣流量時．要觀察基流的改變情況只要基流在增加．仍應相向調節．直至基流不再增加不止最後．再將氫氣流量上調少許。

5.進樣技術

在氣相色譜分析中，一般是採用注射器或六通閥門進樣在考慮進樣技術的時候．主要是以注射器進樣為對象

一、進樣量

進樣量與氣化溫度、柱容量和儀器的線性響應范圍等因素有關，也即進樣量應控制在能瞬間氣化．達到規定分離要求和線性響應的允許范圍之內填充柱沖洗法的瞬間進樣量：液體樣品或固體樣品溶液一般為0．01～10微升．氣體樣品一般為0．1～10毫升在定量分析中．應注意進樣量讀數准確

（1)排除注射器里所有的空氣

用微量注射器抽取液體樣品時．只要重復地把液體抽凡注射器又迅速把其排回樣品瓶．就可做到遺一點。

還有一種更好的方法．可以排除注射器里所有的空氣那就是用計劃注射量的約2倍的樣品置換注射器3～5次．每扶取到樣品後，垂直拿起注射器．針尖朝上任何依然留在注射器里的空氣都應當跑到針管頂部推進注射器塞子．空氣就會被排掉。

（2)保證進樣量的准確

用經畿換過的注射器取約計劃進樣量2倍左右的樣品．垂直拿起注射器．針尖朝上．讓針穿過一層紗布．這樣可用紗布吸收從針尖排出的液體推進注射器塞子．直到讀出所需要的數值用紗布擦乾針尖至此准確的液體體積已經測得．需要再抽若干空氣到注射器里．如果不慎推動柱塞．空氣可以保護液體使之不被排走

進樣方法

雙手章注射器用一隻手(通常是左手)把針插入墊片．窪射大體積樣品(即氣體樣品)或輸入壓力極高時．要防止從氣相色譜儀來的壓力把柱塞彈出(用右手的大拇指)讓針尖穿過墊片盡可能踩的進入進樣口．壓下柱塞停留1～2秒鍾．然後盡可能快而穩地抽出針尖（繼續壓住柱塞)

進樣時間

進樣時間長短對柱效率影響很大，若進樣時間過長．遇使色譜區域加寬而降低柱效率因此．對於沖洗法色譜而言．進樣時間越短越好．一般必須小於1秒鍾。

Ⅶ 最近做液相，想請問高效液相色譜儀器是如何操作的，新手！務必詳細！謝謝，還有那些條件，數據，等~~

1、配製緩沖液
2、用濾膜過濾緩沖液
3、根據你的出峰時間需要，配製不同乙腈比例的流動相，比如說乙腈：緩沖液=1:6或1：4之類
4、將配好的流動相進行超聲脫氣15-20min
5、流動相配好之後，打開色譜工作站，設置方法，查看基線，並進行零點校正
6、取樣進樣檢測

Ⅷ 液相色譜儀的使用方法

液相色譜儀使用及維護

液相色譜儀使用時要非常的注意。

使用卡套柱時，兩端的卡套應時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。

液相色譜柱使用注意：

卡套柱的安裝（加預柱）

1．將卡套架套入柱芯

2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高於柱芯（見下圖）

3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片

4．將"子彈頭"預柱放入卡套片內

5．將卡套帽和卡套架旋在一起，然後用手擰緊

6．然後依同樣的順序連接好柱子的另一端

平衡色譜柱

反相色譜柱在經過出廠測試後是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶。由於色譜柱在儲存或運輸過程中可能會幹掉，因此在用流動相分析樣品之前，應使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水"過渡"。

硅膠柱或極性色譜柱在經過出廠測試後是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡

如何平衡色譜柱？

平衡過程中，將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡）

色譜柱的再生

進行色譜柱再生時，應使用一個謙價的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。


注意：

在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由於NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應該在水洗後用0.1M的氨水沖洗，然後再用水沖洗至鹼溶液完全流出。 如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

色譜柱的維護

1．使用預柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）

2．大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍

3．避免流動相組成及極性的劇烈變化

4．流動相使用前必須經脫氣和過濾處理

5．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，並保存大乙腈中

6．壓力升高是需要更換預柱的信號

Ⅸ 高效液相色譜儀器使用方法

一、脫氣
流動相脫氣對於避免HPLC系統出問題，順利得到一個理想的數據是一個很有效的措施。HPLC系統內是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產生很大的力量，由於氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當氣泡存在時，你將觀察到瞬間的流速降低和系統壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低於預先設定的壓力低限，泵將停止工作。有些泵設計可以很好地排除氣泡，而也有一些泵設計當氣泡存在時將停止運轉。
當一個氣泡通過輸液泵時，由於系統壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達檢測器流通池時系統壓力又恢復到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現，在色譜圖上會出現不規律的毛刺。為解決這個問題，有些儀器公司設計一個反壓控制器，這樣可以在檢測器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動相中直到它們流出檢測器。當然，這個壓力不能超過流通池所能承受的壓力極限，否則可能損壞檢測器。
紫外/可見光（UV/VIS）檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進入並通過流通池的徵兆。有些檢測器對空氣的存在也非常敏感，但表現出的徵兆與UV/VIS不同，例如有報導說，當使用熒光（FL）檢測器時，流動相中溶解氧的存在可能會使一些化合物失去熒光性。此外，對於利用待測物質在電極表面發生氧化還原反應引起電流變化而進行檢測的電化學（EC）檢測器，對流動相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外，氣泡的存在有時還會導致保留時間不重現。
所以，必須注意消除流動相中的空氣，並且還應避免空氣由管路（如PTFE管）滲透進流動相中。
如果適當地關注在使用之前脫去流動相中溶解進的空氣，上述這些問題均能避免，或把影響降至最低。常用的脫氣方法有如下幾種：
1、吹氦脫氣法：利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa壓力下，以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。採用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但我們國內氦氣價格較高，很少有實驗室採用此方法。
2、 加熱迴流法：此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3、 抽真空脫氣法：此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由於真空脫氣會使混合溶劑組成發生變化，從而影響到實驗的重現性，因此多用於單溶劑體系的簡單分析。
4、超聲波脫氣法：將欲脫氣的流動相置於超聲波清洗器中，用超聲波震盪10～20min。此法的脫氣效果zui差。
5、 在線脫氣法：現在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單，低故障，有效。建議購買儀器時一定要購買，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應與公司確認。

二、過濾
任何顆粒物進入HPLC系統後都會在柱子入口端被篩板擋住，zui後的結果是將柱子堵塞，表現出的特徵是系統壓力增加並使色譜峰變形。因此，要採取各種預防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進入HPLC系統中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，並提高數據的可靠性。在HPLC系統中，顆粒物的主要來源有三個途徑：流動相、被測樣品和儀器系統部件的磨損物。
1、流動相如果流動相均由高效液相色譜級溶劑組成，流動相沒有必要過濾。這是因為高效液相色譜級的有機溶劑，例如乙腈、甲醇等，在製造的工藝過程中都已經過了0.2 µm微孔濾膜過濾。同樣的，無論你是買的HPLC級的水還是在實驗室使用超純水凈化系統制備的水，最後一步也是通過0.2 µm微孔濾膜。
然而，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物，例如磷酸鹽，流動相過濾將是必要的一個步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質，例如在蓋試劑瓶的塑料內蓋時，塑料瓶蓋子與瓶口邊緣擠壓就會產生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體物可能完全溶解了，但是少量雜質顆粒存在於流動相中成為殘渣。
流動相通過0.45 µm微孔濾膜過濾對於從流動相中除去所有顆粒物是一個有效方法。0.2 µm微孔濾膜也可以用，但是它們就這個應用而言並不比0.45µm微孔濾膜更有效，而且它的過濾速度會更慢，特別是當實驗室使用的試劑和水的質量不太好時。建議實驗室在編寫制定他們流動相制備標准操作程序（SOPs）時規定，可以借鑒國際上同類實驗室的規定，即：
流動相制備僅採用HPLC級液體時不需要過濾，反之所有流動相組成在使用前必須過濾。
在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端入口採用下沉式過濾器（常見材質有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個過濾器的規格為≥10 µm的微孔物質，所以它不能取代流動相過濾步驟，但是它能除去系統中的塵土並保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2、被測樣品液相系統中的第二個顆粒物來源是被測樣品。一些實驗室在將他們的樣品放置在自動進樣器盤（或手動進樣）以前，所有樣品都先通過一個0.45 µm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。
但是這個過程也有一點需要關註：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過濾後液體中被測物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？
這個問題一般需要通過實驗確認。確認這步是要增加工作量和費用的。過濾器的使用是一種消耗，每個過濾器的價格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時，由於基質大多比較復雜，所以過濾這步已成為不可或缺的一步。在實際分析工作中，一般檢測每一組樣品會帶一個外標、一個添加回收或是質控樣品，所以，只要zui終檢測時得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為系統誤差而忽略。
3、儀器系統部件的磨損物最後，在HPLC系統中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關於輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
一種建議認為，在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實驗室應基於上述觀點制定定期預防性維護計劃。該觀點認為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費用相比，更換密封墊的費用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動相流至柱頭。若有這種裝置應查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。
另一種建議則認為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以後容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
兩種說法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。
自動進樣器旋轉軸的密封隨著使用時間也會磨損，但是在我的經驗中，即便是高負荷的運轉旋轉軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動進樣器系統有計數進樣閥轉動次數的功能，你可以設定一個警鈴當預設閥轉動次數已達到時提醒你。
曾有一種說法，進樣器最多轉動20,000次，這僅僅是進樣10000個；但這似乎不是實驗室涉及的常規樣品分析使用壽命，它們的實際使用壽命會更長。旋轉軸密封磨損後會滲液，比較明顯的特徵是同一樣品多次進樣後，峰面積值差別比較大（RSD>5%）。當然，輸液泵的密封墊和旋轉軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動相中，加速對這些部件的損傷。
此外，如果你日常運行的流動相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會更快。無論顆粒物源於何物，實驗時都要將其除去。推薦在HPLC系統中採用一個0.45或0.5 µm的在線多孔過濾器，接在自動進樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如採用一個玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鍾就可更換）。若採用在線過濾，HPLC系統檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以後沖洗幾分鍾系統將恢復到原來的壓力值。

三、沖洗
使HPLC系統良好運行的第三個要點是保持系統的清潔。你需要關注流動相流經該系統的所有地方，對於這些地方經常性的沖洗，將使你的系統保持在「Ready」狀態。
1、流動相儲液瓶首先要經常清洗流動相儲液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動相。一個臟的儲液瓶將會污染注入的流動相。建議儲液瓶中緩沖液使用時間不要超過一周，而有機溶劑使用時間不要超過一個月。
也有人建議儲液瓶中保持用溶劑充滿，直到更換分析方法儲液瓶需更換新溶劑（流動相組成發生變化）時，將舊溶劑倒掉更換新溶劑，這樣勝於將溶劑用完。但這對於分析樣品量少的實驗室而言似乎有些浪費。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換，每周瓶子還應該用異丙醇清洗一次。有的實驗室則在水裡加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生長。這些做法看起來有些繁瑣，但卻能起到「磨刀不誤砍柴工」作用。
2、泵接下來要沖洗的是泵。千萬不要一分析完沖幾分鍾後就停泵，特別是當流動相中含有難揮發的緩沖液（如磷酸鹽）時。如果儀器不是連續使用，當流動相蒸發時，難揮發物就會粘在活塞密封墊的表面，難揮發物將形成固形物沉澱。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無論使用長短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，要是流動相中有難揮發緩沖鹽則建議沖洗的時間應該更長些。
3、自動進樣器自動進樣器也要按規定清洗。現在的儀器多配有自動進樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時更換、補充沖洗液即可。自動進樣器用的洗滌液也要採用與流動相相同的方式處理，並根據溶劑的有效期和規定，清洗儲液瓶或更換洗滌液。現在的自動進樣器設置、操作都很簡單，如果時間允許（特別是利用夜間運行），每次分析完後設置進1、2針純溶劑（如甲醇、乙腈），也是一個好做法。
4、色譜柱對柱子的污染是隨使用時間而增加。通常表現是：運行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個問題的zui有效方法就是在每一批樣品分析結束後或准備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據柱子的說明書和性質而定。
5、檢測器如果是正常使用，檢測器將依據其性質並按照說明書規定進行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器，在對柱子和系統進行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進行了清洗。但是蒸發光檢測器或質譜儀則需要按照說明書進行定期清洗。這些檢測器在使用時會有難揮發污染物沉積，如質譜儀離子源的噴針、毛細管、錐孔板、預四極等部件，因而需要定期清洗。而且對聯有這些檢測器的系統沖洗時，最好與這些檢測器斷開，以減少對檢測器的污染。
總之，實驗室日常使用的液相色譜儀要是能認真做好這三項工作——脫氣、過濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預防性維護，使用時就會感到比較順手。當然，在實際操作時遇到的問題並沒有這么簡單，但這三個良好習慣將是正確操作、使用HPLC系統的基礎。答案來自