⑴ 光度分析實驗中,為什麼要用參比溶液調節儀器的零點
那就是符合朗伯比爾定律定律的要求,達到扣除測定物質之外的一切吸光值。
⑵ 測定樣品吸光度前,必須用參比溶液做空白試驗,為什麼
參比溶液:用來調節儀器的零點,消除由於吸收池壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差,並扣除干擾的影響。
⑶ 製作吸收曲線時,為什麼每改變入射光波後,都必須用參比溶液
由於比色皿和參比溶液對不同波長的入射光有不同的反射和吸收,所以當測量波長改變時,都要用參比溶液進行調零,這樣才能測出有色物質在該波長下的實際吸光度。
在進行光度測量時,利用參比溶液來調節儀器的零點,可以消除由於吸收池壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差,並扣除干擾的影響。
(3)為什麼要參比溶液調節儀器擴展閱讀
選擇參比溶液可分為以下幾種情況:
1、溶劑參比顯色劑及其它試劑均無色,被測溶液中又無其它有色離子時,可用溶劑(如蒸餾水或其它有機溶劑)作為參比溶液。
2、試劑參比顯色劑本身有顏色,可用不加試樣的其它試劑作為參比溶液。
3、試液參比顯色劑無色,被測溶液中有其它有色離子,可採用不加顯色劑的被測溶液作為參比溶液。
4、其它參比當顯色劑有色,試液中的有色成分干擾測定時,可在一份試液中加入適當的掩蔽劑,將被測組分掩蔽起來,然後加入顯色劑和其它試劑,以此作為參比溶液。
另一種方法,是用不含被測組分的試樣,與被測試樣同時進行相同的處理,得到平行操作參比溶液。如血液中葯物濃度監測,取不含葯物的血樣制備平行操作參比溶液。
⑷ 用分光光度法測定時,為什麼要用參比溶液來調節儀器透光度為100%
當某波長光通過溶液時,其中的某些粒子會產生吸收,分光光度法通過檢測光強度變化來確定溶液中粒子濃度,不同濃度的粒子吸收的某波長的光是不一樣的。所謂參比溶液,即不含待測粒子的空白對照溶液,待測粒子濃度為0,規定此溶液完全透光;以此為基準,測定其他含待測粒子溶液的濃度。
⑸ 為什麼要用參比溶液來調節透光度
1.不是所有的吸光光度分析中都以試劑空白做參比溶液,一般是:
(1)高吸光度法。光電檢測器未受光時,其透光度為零,光通過—個比試樣溶液稍稀的參比溶液後照到光電檢測器上,調其透光度(T)為100%,然後測定試樣溶液的吸光度。此法適用於高含量測定。
(2)低吸光度法。先用空白溶液調透光度為100%,然後用一個比試樣溶液稍濃的參比溶液,調節透光度為零,再測定試樣溶液的吸光度。此法適用於痕量物質的測定。
(3)雙參比法。選擇兩個組分相同而濃度不同的溶液作參考溶液(試樣溶液濃度應介於兩溶液濃度之間),調節儀器,使濃度較大的參比溶液的透光度為零,而濃度較小的參比溶液的透光度為100%,然後測定試樣溶液的吸光度。
3、鄰二氮菲分光光度法直接測二價鐵;
全鐵—先用三氧化錫將三價鐵還原成二價鐵,然後加入氯化高汞以氧化過量的三氧化錫,而後按二價鐵的方法測就行了
⑹ 在光度分析實驗中為什麼要用參比溶液調節儀器的零點
不進行此項操作,會引入空白溶液誤差,不能保證結果的有效性。
⑺ 測量吸光度時為什麼要用參比液,選擇參比液的原則是什麼
因為樣品溶於溶液,溶劑等也對紫外有吸收,因此需要參比液扣除多餘的紫外吸收,得到真正的樣品的紫外吸收。
選擇適當的參比溶液:
a. 如果僅有顯色劑與被測組分反應的產物有吸收,則可以用純溶劑作參比溶液;
b. 如果顯色劑和其他試劑有顏色,則用試劑溶液作參比液;
c. 如果顯色劑與試劑中干擾組分反應,其反應產物有吸收,則按如下方式配置參比液:(1) 吸收較弱時,直接用試劑溶液作參比液; (2)吸收較強時,可選用合適的掩蔽劑將被測組分掩蔽後再加顯色劑和其他試劑,以此配製的溶液作參比液。
⑻ 測定吸光度時,為什麼要選擇參比溶液選擇參比液的原則是什麼
參比溶液是為了消除其除了本身的物質以外的外在影響因素;原則也就是除了需要測定的物質,其餘的都要相同。
參比液中應不含被測物及不含影響被測元素吸收單色光有干擾的物質,一般可以用蒸餾水做參比,有的實驗需要扣除空白,這時的參比是和試樣一樣的處理方法,除了不含被測物質之外。
如果僅有顯色劑與被測組分反應的產物有吸收,則可以用純溶劑作參比溶液;如果顯色劑和其他試劑有顏色,則用試劑溶液作參比液。
原理
吸光系數與入射光的波長以及被光通過的物質有關,只要光的波長被固定下來,同一種物質,吸光系數就不變。
當一束光通過一個吸光物質(通常為溶液)時,溶質吸收了光能,光的強度減弱。吸光度就是用來衡量光被吸收程度的一個物理量。
吸光度用A表示。A=abc,其中a為吸光系數,單位L/(g·cm),b為光在樣本中經過的距離(通常為比色皿的厚度),單位cm , c為溶液濃度,單位g/L。A=Ecl影響吸光度的因數是b和c。a是與溶質有關的一個常量。此外,溫度通過影響c,而影響A。
以上內容參考:網路-吸光度
⑼ 為什麼在分光光度法中必須使用參比溶液
分光光度法分析中,為什麼要使用參比溶液
因為:用分光光度計測量,被測的都為液體,通常是稀釋後的,要測的是溶質吸光度,而溶劑也是有影響的,所以要有參比
⑽ 分光光度法分析中,為什麼要使用參比溶液
一、原理
可見光、紫外線照射某些物質,主要是由於物質分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收,而產生化合物的可見紫外吸收光譜.基於物質對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法.它是以朗伯——比耳定律為基礎.
朗伯—比耳定律 A = lg—- = ECLT
式中 A為吸收度;
T為透光率;
E為吸收系數,採用的表示方法是(E1%1cm),其物理意義為當溶液濃度為1%(g/ml),液層厚度為1cm時的吸收度數值;
C為100ml溶液中所含被測物質的重量(按乾燥品或無水物計算),g;
L為液層厚度,cm.
二、使用范圍
凡具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物,根據在特定吸收波長處所測得的吸收度,可用於葯品的鑒別、純度檢查及含量測定.
三、儀器
可見-紫外分光光度計.其應用波長范圍為200~400nm的紫外光區、400~850nm的可見光區.主要由輻射源(光源)、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成.
本儀器是根據相對測量的原理工作的,即先選定某一溶劑(或空氣、試樣)作為標准(空白或稱參比)溶液,並認為它的透光率為100%(或吸收度為0),而被測的試樣透光率(或吸收度)是相對於標准溶液而言,實際上就是由出射狹縫射出的單色光,分別通過被測試樣和標准溶液,這兩個光能量之比值,就是在一定波長下對於被測試樣的透光率(或吸收度).
本儀器可精密測定具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物、有色物質或在適當條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質.
使用前應校正測定波長並按儀器說明書進行操作.
四、儀器的校正
1.波長的准確度試驗
以儀器顯示的波長數值與單色光的實際波長值之間誤差表示,應在±1.0nm范圍內.
可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正.
2.吸收度的准確度試驗
3.雜散光的試驗
4.波長重現性試驗
5.解析度試驗
五、測定方法
1.對照品比較法
(1)按各品種項下的方法,分別配製供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%,所用溶劑也應完全一致,在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度後,按下式計算含量,即得.
(2)計算式
A樣×G對/稀釋倍數×100×1
含量(%)= ————————————-- ×100%
A對×G樣/稀釋倍數×100×1
2.吸收系數法
(1)按各品種項下的方法配製供試品溶液,在規定的波長處測定其吸收度,再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量.用本法測定時,應注意儀器的校正和檢定.
(2)計算式
A樣
含量(%)= ——————————————- ×100%
G樣/稀釋倍數×(E1%1cm)對×100×1
3.計算分光光度法
採用計算分光光度法應慎重.本法有多種,使用時均應按各品種項下規定的方法進行.當吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時,波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響,故對照品和供試品測試條件應盡可能一致.若測定時不用對照品,如維生素A測定法,則應在測定時對儀器作仔細的校正和檢定.
六、注意事項
1.空白溶液與供試品溶液必須澄清,不得有渾濁.如有渾濁,應預先過濾,並棄去初濾液.
2.測定時,除另有規定外,應以配製供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照,採用1cm的石英吸收池.
3.在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規定外,吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內;否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的准確度,並以吸收度最大的波長作為測定波長.
4.一般供試品溶液的吸收度讀數,以在0.3~0.7之間的誤差較小.
5.吸收池應選擇配對,否則要引入測定誤差.在規定波長下兩個吸收池的透光率相差小於0.5%的吸收池作配對,在必要的情況時,須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值.
6.由於吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸收度後應減去空白讀數,再計算含量.
7.儀器的接地必須良好,一切裸露的零件對地電位不得超過24伏(測電筆的氖管不得發亮).
8.在使用過程中,如需開啟試樣室蓋時或暫時停止測試時,必須及時推入光門鈕桿(使光電管前光門關閉),保護光電管,以防止光電管受強光或長時間照射而損壞.
9.在測定時或改測其它檢品時,應用待測溶液沖洗吸收池3~4次,用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕(切忌把透光面磨損).
10.取吸收池時,應拿毛玻璃兩面,切忌用手拿捏透光面,以免粘上油污.使用完後及時用測定溶劑沖凈,再用純化水沖凈,用干凈綢布或擦鏡紙擦乾,晾乾後,放入吸收池盒中,防塵保存.
11.若吸收池內外壁沾污,兩池差較大的處理.
(1)可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細玻璃棒上蘸上乙醇,輕輕摩擦,再用純化水沖凈.
(2)如上述方法處理不好,必要時可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗1~2分鍾,用自來水沖凈,再用純化水沖凈.
(3)不得用毛刷刷洗或硬物拭擦,以防止表面光潔度受損影響正常使用.
12.請務必注意經常保持硅膠的乾燥,目的是保護光學元件和光電放大器系統不致受潮損壞而影響儀器的正常工作,如發現有的硅膠由藍色變為粉紅色,應立即更換.該儀器乾燥劑筒有兩個:一個是裝在放大器暗盒上,另一個裝在單色光器暗盒上.
13.在更換硅膠乾燥劑時,應關閉切斷電源.
14.在停止工作期間,主機試樣室內應放入袋裝或筒裝硅膠乾燥劑.用防塵罩罩住整個儀器,並在防塵罩內放數袋防潮硅膠.
15.儀器在操作中,狹縫的寬度應從小逐漸開大.若狹縫過大,由於進入光電管的光能量強度過大,將會使放大器輸出信號達到飽和,以至數字顯示出溢出(即數字閃爍或示1不變).這不是儀器有故障.
16.將波長旋轉放在625nm,鋏縫關閉在0.02nm附近,選擇按鍵恢復在停止工作部位(即三個鍵均彈出).
17.搬動儀器時應搬在主體端,不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位,以防止儀器狹縫或光路部件受力而發生變形.並在搬動或運輸時,應將可動部分固定,如各旋鈕可用膠布貼住,狹縫位置開大些,然後固定,不要關小狹縫,以免運輸時振動使狹縫刀口受損壞.
18.儀器的光柵、反射鏡絕對不能擦拭,否則將損壞儀器光學表面,增加雜散光.
19.儀器經過搬動請及時檢查並糾正波長精度,為保證測定的准確性請經常校準波長精度.如有異常,應立即報告質量保證部,但不得擅自調整,並及時做好記錄.
七、結果計算
A
E1%1cm(供試品) = ——
CL
E1%1cm(供試品)
含量(%)= ——————————- ×100%
E1%1cm(標准值或對照品)
八、允許差
儀器分析方法的誤差限度,除另有規定外,其相對偏差應在±(2.0~3.0)%.