『壹』 請問什麼叫QPCR
QPCR 問:什麼是QPCR?答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即實時熒光定量核酸擴增檢測系統,也叫實時定量基因擴增熒光檢測系統,簡稱QPCR。問:QPCR、DNA檢測、PCR之間的關系?答:聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction簡稱PCR)原理憑借敏感、特異、快速的特點榮獲93年諾貝爾化學獎。因其在病原體檢測方面的獨特優勢,因而發達國家在相關方法和儀器方面的研發非常快,成為分子生物學診斷的主流,至今仍處於學術和應用前沿:第一代產品:基因擴增熱循環儀(DNA Thermal Cycler)+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑,構成PCR定性檢測。第二代產品:基因擴增熱循環儀+熒光儀+終點定量試劑,構成PCR-DNA終點法定量檢測(End-point quantitative PCR detection),又分為終點酶免定量( End-point ELISA-PCR)和終點熒光定量(End-point Fluor-PCR)兩種。第三代產品:實時定量QPCR儀+實時熒光定量試劑,構成QPCR-DAN/RNA實時熒光定量檢測。問:相比以前的方法,QPCR有哪些特點?答:QPCR至少有以下特點:所用儀器少,只用一台儀器。檢測時間短,只須45分鍾~1小時10分鍾(試劑各異),而定性PCR須3~4小時,酶免終點定量須6~8小時,熒光終點定量須2~3小時。操作極其簡單:前處理後,樣本插入儀器一小時後到電腦上來出報告即可,無須開蓋,移樣本(以前方法),避免污染。結果精確:定性PCR只能定性,很粗略,終點定量PCR由於只能在40個熱循環結束後檢測熒光,被測熒光達到飽和導致定量不夠精確,屬於半定量狀態。而實時熒光QPCR是在擴增的每時每刻連續檢測各樣本的熒光值的變化,如圖一所示: 圖一 西安天隆TL988實際曲線1檢測動態范圍:10~10000000000 DNA copies/ml檢測精度:0.1RLU辨別率:5000和10,000個模板拷貝樣本的辨別率99.7%。問:QPCR的技術先進性、價格及應用現狀?答:實時熒光QPCR是當今世界用於臨床的最先進核酸分子診斷技術,被美國FDA承認並推崇,被美國FDA批准並取得臨床應用執照的QPCR試劑品種有:HBV乙肝病毒DNA,HCV丙肝病毒RNA,HIV艾滋病病毒RNA,Chlamydi trachomatis(CT),性傳播疾病,沙眼衣原體,Neiserria gonorrhea(NG),性傳播疾病,淋病雙球菌,Cytomegalovirus(CMV),性傳播疾病,巨細胞病毒,Mybobacterium tuberculosis(Mtb),呼吸道疾病,結核分支桿菌等。實時熒光PCR儀研發技術難度大,門檻高,發達國家也只有有限幾家知名公司生產,且售價昂貴:如美國ABI/7700-120萬元,美國ABI/5700-50萬元,瑞士Roche/Lightcycler-70萬元,美國Stratagene公司2005年新品MX3005P-80萬元 可見,在病人看來,哪家醫院應用了QPCR技術便是先進診斷技術的象徵,在發達國家也是如此。 國產儀器情況:國產儀器生產單位不超過五家,其中包括:日本獨資杭州博日實時熒光QPCR儀(33孔)西安天隆科技有限公司TL988實時熒光QPCR儀(48孔) 以上產品均取得國家SFDA認證,報價均在45萬以上。 國產試劑情況:多家公司生產實時熒光QPCR試劑盒,價格與終點法試劑相當,且品種齊全,價格便宜,購買方便:乙肝HBV-DNA,丙肝HCV-RNA,艾滋AIDSHIV-RNA,性病系列:淋病雙球菌NG、沙眼衣原體CT、解脲支原體UU、皰疹病毒HSV、人體乳頭瘤HPV,優生優育系列:巨細胞病毒CMV、弓形蟲COX等。 編輯詞條 開放分類:病毒、DNA、PCR、分子生物、實時熒光定量PCR儀 參考資料: 1. http://hi..com/pcr%D2%C7 2. http://www.medtl.com 貢獻者:zhang120jing、弦之月NONO
『貳』 什麼是qPCR引物
就是quantitative PCR(定量PCR) 引物
實時定量PCR可以用於DNA技術,RNA及蛋白質分析和診斷
『叄』 實時熒光定量pcr就是qpcr嗎
實時熒光定量PCR(qPCR)用什麼試劑盒比較好 加入熒游標記探針,巧妙地把核算擴增、雜回交、光譜分析和實時檢測技答術結合在一起,藉助於熒光信號來檢測PCR產物。一方面提高了靈敏度,另一方面還可以做到PCR每循環一次就收集一個數據
『肆』 qPCR 4通道和 6 、8 通道有什麼區別
樓主說的好像是qPCR機器能夠讀取的熒光頻段啊。我本人只做過單色熒光的qPCR,對於多個目標專同時反應的qPCR只聽說過屬。
因為多個引物對,探針,同時在一鍋粥裡面,其交互作用及爭奪酶和核苷酸等擴增資源,以及熒光跨頻段干擾的情況非常復雜難以預測。
使用多通道的好處是快速產生大量數據,但是優化的過程很費時,一般只有在樣本數量非常大(成百上千的樣本),或者單個樣本量非常少(幾十ng的RNA)的情況下面使用。
通道數目就是你同時能夠檢測幾種不同的目標序列擴增反應。請根據需要和能力選擇。通道太多隻影響儀器價格,不影響在單通道或較少通道情況下的使用。即是殺雞用牛刀也。。。
『伍』 qPCR和qRT-PCR各有什麼優缺點我該選擇那個
QRT PCR一般指抄以RNA為模板,先逆轉成cDNA,再進行qPCR
而qPCR一般是泛指,既可以當它是qRTPCR,也可以指他是專門定量檢測DNA的
比如檢測細菌的16S,那不需要做RT,直接用qPCR檢測定量即可。
『陸』 什麼是qPCR引物
就是quantitative PCR(定量PCR) 引物
實時定量PCR可以用於DNA技術,RNA及蛋白質分析和診斷
『柒』 qPCR 幾通道 是什麼意思 好像有4 6 8 通道
應該指的是real-time pcr儀的通道,雙通道、四通道、六通道等等。
多通道指可同時檢內測一個樣品中的多種熒光,容儀器就可以同時檢測單管內多模版或者內標+樣品,通道越多,儀器適用范圍越寬、性能就更強大。
『捌』 RT-PCR,QRT-PCR,real-timePCR之間什麼區別
PCR:一種快速的DNA復制方法,由變性--退火(復性)--延伸三個基本反應步驟構成。
RT-PCR:反轉錄PCR(reverse transcription-PCR),是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA(cDNA),再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。
QRT-PCR在RT-PCR體系中同時加入內參標基因的引物,使目的基因和內參基因在同一條件下同時擴增。在擴增反映結束之後,可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行半定量分析,但分析的是PCR終產物,不能准確分析未經PCR信號放大之前的起始模板量。
real-time PCR:實時PCR(real-time PCR)屬於定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時間內DNA的增幅量為基礎進行DNA的定量分析。
Real-timePCR與reverse transcription PCR相結合,能用微量的RNA來找出特定時間細胞組織內的特別表達的遺傳基因。這兩種RT PCR的組合又被稱之為定量RT-PCR(QRT-PCR)。

(8)qpcr是什麼設備擴展閱讀:
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。
PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。
『玖』 請問實驗室的常用技術PCR,qPCR,rtPCR,western blot 分別是為了什麼目的進行的實驗
pcr 常用就是擴基因,復提完rna後反轉啊,那制你擴來基因用做什麼就需要你來看了。
菌落PCR,也是擴,放大數目,好驗證。
qPCR是熒光染料,做定量,一般是看錶達,就是基因的表達情況,基因層面
rtPCR是半定量,相對上面的定量來說沒有完全量化,相當於是質化,也能看出問題
western 是做蛋白的
『拾』 實時熒光定量pcr內參是什麼東西
實時熒光定量pcr內參是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質測每次聚合酶內鏈式反應(PCR)循容環後產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。

(10)qpcr是什麼設備擴展閱讀:
PCR原理:
1、PCR技術的基本原理類似於DNA的天然復制過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
2、PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成:
①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
③引物的延伸:DNA模板-引物結合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。每完成一個循環需2~4分鍾,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。