tht荧光强度用什么仪器测定

A. 能否用荧光计代替荧光分光光度计

荧光计，包括通过透镜与激励滤光片光学连接的光源，与记录滤光片光学连接的样品池和记录系统，其中，光源是脉冲式的，记录系统是三通道式的，每一通道都包含一光电接收器，光电接收器与选通积分器连接，选通积分器的输出端与模数转换器相连，所述光电接收器中之一经缓冲放大器与模数转换器连接，所有的选通积分器都与测量选通脉冲整形器连接，模数转换器及测量选通脉冲整形器与控制装置连接，所述控制装置与显示装置连接。

荧光剂的工作原理是光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后，此光即为荧光物质的激发光，被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪。

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定， 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化， 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。

B. 如何用流式细胞仪分析荧光强度

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激光激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不相同。每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后又产生特定波长荧光。通过一些波长选择通透性滤光片，可将不同波长的散射光、荧光信号区分开。选择不同的单克隆抗体及荧光染料可以利用流式细胞仪同时测定一个细胞上的多个不同特征。

（一）荧光信号测量与放大器

线性放大器用于测量信号强度变化范围较小的信号或具有生物学线性过程的信号，如前向散射光的测量与CD3+细胞DNA指数的测量。

对数放大器用于测量信号强度变化范围较大且其光谱信号较复杂的信号，在免疫测量中最常使用。

（二）荧光补偿

依靠滤光片是不能完全阻挡干扰信号，在每两种荧光的发射光信号中仍有不可避免的重叠现象。该重叠区越大，信号检测的准确性越差。通常采用荧光补偿的方法来消除重叠信号，保证检测信号的准确性。

C. 荧光检测器的类型

荧光检测器类型：1、激发光谱。荧光属于光致发光，需选择合适的激发光波长(Ex)以利于检测。激发波长可通过荧光化合物的激发光谱来确定。激发光谱的具体检测办法是通过扫描激发单色器，使不同波长的入射光激发荧光化合物，产生的荧光通过固定波长的发射单色器，由光检测元件检测。最终得到荧光强度对激发波长的关系曲线就是激发光谱。在激发光谱曲线的最大波长处，处于激发态的分子数目最多，即所吸收的光能量也最多，能产生最强的荧光。当考虑灵敏度时，测定应选择最大激发波长。2、发射光谱。一般所说的荧光光谱，实际上仅指荧光发射光谱。它是在激发单色器波长固定时，发射单色器进行波长扫描所得的荧光强度随荧光波长(即发射波长，Em)变化的曲线。荧光光谱可供鉴别荧光物质，并作为荧光测定时选择合适的测定波长的依据。

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