⑴ 通过了解流式细胞术及仪器发展简史你有哪些思政启发
万物既渺小又伟大。
流式细胞术是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。 流式细胞术（Flow CytoMetry，FCM）是对悬液中的单细胞或其他生物粒子，通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。随着流式细胞术的发展，出现了多种型号的流式分析仪、分选仪，同时随着配备的激光器的不断升级，有些流式分析仪可进行多达10色以上的荧光分析。
流式细胞术主要应用于生命科学的基础研究，尤其是免疫学、细胞生物学和分子生物学。80年代后期开始应用于临床，辅助多种疾病的诊断，尤其是白血病的诊断和分型。随后，利用流式分选干细胞过继回输用于疾病治疗，如NK细胞回输提高免疫力，CIK治疗等。
⑵ 流式细胞仪的原理是什么
最近一直在了解流式细胞术和流式分选的知识，看到这个问题想回答一下：
流式细胞仪是以流式细胞术为基础，快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选。分析流程为：制备单细胞悬液，用特异性荧光染料标记的抗体进行染色，经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室，在鞘液的包裹下细胞呈单行排列，依次通过检测区域，在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号，通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，进行分析。
如上所述，流式细胞仪是由液流系统、光路系统以及检测分析系统三部分组成，部分仪器还具有分选功能，能对粒子进行充电和偏转从而实现细胞分选。
液流系统：通过产生压力使含有目的细胞的样本快速进入仪器，在封闭的样品管中利用样品和鞘液之间的压力差是样本聚集到光学分析系统；
光路系统：由不同的激光器发射出的激光照射到细胞表面产生光信号，而后经过不同的光路系统被接收。在流式照射室的分析点，激光照射到细胞表面发生散射和折射，并发射出散射光包括前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）,同时细胞表面的荧光素被激发发射出荧光。前向散射光和侧向散射光检测器收集散射光转变为电信号；荧光则被聚光器收集，不同颜色的荧光被双色反光镜转向不同的光电倍增检测器，将荧光信号也转变成电信号。FSC和SSC是流式分析中两个非常基本的参数。FSC的值能代表细胞的大小，细胞的体积越大则FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度，细胞内细胞器和颗粒度越大则SSC越大。
检测分析系统：荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度，光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。
流式细胞分选是在流式细胞术的基础上进行的。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体，产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷（对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷；未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷；而不含有细胞的液滴则不被带电荷），当液滴流经偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不带电荷的液滴落入废液容器，从而实现细胞的分离。
第一次回答希望能帮到你，如有理解不当的地方，欢迎指正！
⑶ 流式细胞仪分析技术及应用
在2019年的三月份我正式开始做单细胞相关研究工作，有趣的同时也是朋友我们经常误会的是：你是不是用流式细胞术？而我在得知自己要做这单细胞（single cell ）的研究时，在Google搜关键词（single cell ），居然有不少是介绍流式细胞术的。流式细胞术应用到高通量测序领域就变成了微流控技术。可见，把生命科学的视界拉倒单细胞水平的比高通量测序更早的是流式细胞术。
那么在单细胞测序技术出现之前，人们在研究单细胞的时候都是怎么做的呢，都有哪些分析点呢？单细胞测序技术给单细胞研究带来了哪些新的视角？这一切的答案都要求我们对流式细胞术有一个基本的了解。
流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。
流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。
采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。
（1） 液流系统
（2） 光学系统
（3） 数据处理系统
激光光源：气冷式氩离子激光器
分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长
光束成形器：两十字交叉放置的透镜
透镜组：形成平行光，除去室内光
滤片：长通、短通、带通
光电倍增管：FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（荧光）
测得的FS与SS信号通过计算机处理，可得到FS-SS图，由此可仅用散射光信号对未染色的活细胞进行分析或分选。此为血细胞分类的基本原理，但不能分析表面分子。
荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。
每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的光电倍增管。
选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。
线性放大器和对数放大器
通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。
FS：反映颗粒的大小
SS：反映颗粒的内部结构复杂程度
FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少
单参数直方图
双参数直方图:点图
二维等高图
假三维等高图
三参数直方图
多参数分析
双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。
双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。
由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。
等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。
曲线层次越高(越里面的线) 所代表的细胞数愈多。
等高线越密集则表示细胞数变化率越大。
流式细胞仪(FCM)是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。
①细胞生物学 ：细胞凋亡研究；定量分析细胞周期并分选不同细胞周期时相的细胞；分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表达产物等物质与细胞增殖周期的关系，进行染色体核型分析，并可纯化X或Y染色体。 [详细]
②肿瘤学 ：DNA倍体含量测定是鉴别良、恶性肿瘤的特异指标。近年来已应用DNA倍体测定技术，对白血病、淋巴瘤及肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种实体瘤细胞进行探测。用单克降抗体技术清除血液中的肿瘤细胞。 [详细]
③免疫学 ：研究细胞周期或DNA倍体与细胞表面受体及抗原表达的关系；进行免疫活性细胞的分型与纯化；分析淋巴细胞亚群与疾病的关系；免疫缺陷病如艾滋病的诊断；器官移植后的免疫学监测等。 [详细]
④血液学 ：血液细胞的分类、分型，造血细胞分化的研究，血细胞中各种酶的定量分析，如过氧化物酶、非特异性酯酶等；用NBT及DNA双染色法可研究白血病细胞分化成熟与细胞增殖周期变化的关系，检测母体血液中Rh(+)或抗D抗原阳性细胞，以了解胎儿是否可能因Rh血型不合而发生严重溶血；检测血液中循环免疫复合物可以诊断自身免疫性疾病，如红斑狼疮等。 [详细]
⑤药物学 ：检测药物在细胞中的分布，研究药的作用机制，亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰，Bcl-2凋亡调节蛋白等。 [详细]
细胞凋亡研究 ：细胞凋亡是细胞在基因控制下的有序死亡，在疾病发生、发展中有重要作用，因而研究细胞凋亡有重要意义。细胞凋亡检测方法很多，应用流式细胞仪技术可根据细胞在凋亡过程中发生一系列形态、生化变化从多个角度对细胞凋亡进行定性和定量的测定。 [详细]
** 细胞分选**：流式细胞仪能够分选某一亚群细胞,分选纯度＞95%。目前细胞分选主要用于研究，临床应用较少。利用流式细胞仪分选免疫担当细胞进行细胞免疫学研究也是目前的热门课题。流式细胞仪能够分选出你想得到的任何一亚群细胞，只要你想得到的某一亚群细胞有合适的单克隆抗体标记。 [详细]
** 细胞因子的检测**：随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。本文主要对胞内细胞因子流式细胞技术作介绍。 [详细]
** 血液学应用**：本文向您介绍流式细胞仪在血液研究领域的应用，包括DNA倍体分析及细胞周期分析，淋巴细胞亚群测定，白血病免疫分型，淋巴瘤免疫分型，红细胞疾病诊断，血小板功能分析和血小板病诊断，微小残留白血病检测，白细胞吞噬功能测定，NK和LAK细胞活性测定，造血干/祖细胞测定等。 [详细]