核酸提取仪器怎么启动

① 核酸pcr步骤

一、个人三级防护穿戴

带一次性帽子、佩戴医用N95、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一层乳胶手套、外层一次性隔离衣、防护目镜、第二层乳胶手套、穿戴完毕后应尽快通过专用缓冲间或者走廊，进入核酸提取区（专业核酸提取实验室）。


二、样本灭活处理

核酸检测须有两名工作人员快速通过进入实验室，进行灭活实验操作。生物安全柜内需配备吸水棉与消毒酒精、有条件可配备吸水台布，对样本溢洒时进行紧急处理；打开二级容器，用75%酒精消毒物体表面，检测样本管密闭性后进行灭活处理，灭活条件（56℃，30min，恒温样本灭菌仪等多种方式），取出酒精灭活管用酒精擦拭外表，将样本放入到生物安全柜内。

三、手工核酸提取

操作人员进入试剂配置区或者单独的洁净实验室。

一、试剂区准备

根据说明说要求，在AW1中加入无水乙醇130mL，在AW2中加入无水乙醇160mL，计入无水乙醇后及时做好标记，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，并颠倒混匀使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而后通过传递窗传送到样本处理区，或者由专人送到核酸提取实验室中。

二、样本的裂解

用1.5ml的无菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已灭活的待提取核酸的待测样本，涡旋振荡15s，室温静止10min。将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物，防止污染。裂解完成后，加入560μl无水乙醇，振荡混匀15s，将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物，防止污染。

向离心柱加入裂解产物630μl，8000转离心1min，若离心机在生物安全柜之外，每次使用都需进行外表面消毒。更换新废液收集管，要从离心机中小心取出离心柱，将上层离心柱转移到新收集管中，继续将剩余裂解产物630μl加入离心柱中，若样本体积大于140μl时需重复此步骤，直到全部裂解产物都过柱离心，8000转离心1min，小心将离心柱转移到新的收集管中。

取500μl AW1加入离心柱中（注意，此处加样操作时务必将移液器吸头接触离心柱内壁缓慢加样），8000转离心1min。小心取出离心柱，更换新的收集管。

取500μl AW2加入离心柱中，14000转离心3min，小心取出离心柱，更换新的离心柱上端收集管，置于离心机中使用最大高谈转速离心1min，以确保将AW2中的残液完全离心干净。

取无菌1.5mlEP管收集核酸，将离心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脱液AVE加入到离心柱中（注意：洗脱液应尽量全部覆盖住离心柱膜），用EP管管盖盖住离心柱，使用无菌剪刀剪去原离心柱管盖。

室温静止1min，将其亏行放入离心机中8000转离心1min，回收核酸。丢弃离心柱，EP管中即为获取的提取核酸，做好标记与登记。

四、用仪器提取核酸

首先按照说明说准备核酸提取试剂，将200μl灭活样本添加到核酸提取试剂中，根据核酸提取仪的设置程序上机提取核酸，等仪器操作结束，提取核酸完成，回收核酸。

五、PCR体系配置

根据检测样本数量配制体系，将配制好的PCR体系充分混匀并离心销念哗后，将其通过传递窗送至样本处理核酸加样区，或单独的样本加样实验室。按照每孔分装20μL反应体系，进行分装，在各孔分别加入5μL待测样本核酸或阴阳对照物（请注意每次检测器包含1个阳性对照和3个阴性对照且阴性对照需随机分布），密封PCR管，有条件时模板加样尽量在单独的生物安全柜进行。

工作人员将配好的PCR管通过传送窗口送至PCR扩增区，或由专人送至PCR扩增实验室，上机检测。

六、上机检测及结果分析

工作人员进入基因扩增分析实验室，从传递窗取出PCR反应管，上机前需混匀并离心反应体系，按试剂盒说明说设置扩增参数并分析判读结果。分析结果时，严格阅读说明说充分了解试剂盒灵敏度、方法学局限性等综合判读实验结果。

为防止扩增污染，反应结束后的PCR扩增管严禁开盖并装入密封带中装入指定的垃圾桶中。

七、检测后的消毒处理

样本处理完成后，工作人员应用75%的酒精消毒处理外层手套并脱下外层手套，放入生物安全柜中的生物垃圾桶中。检测完成后，生物安全柜台面和地面应用0.5-1%的有效氯消毒剂或75%乙醇进行擦拭。将安全柜内产生的医疗垃圾用三层垃圾袋密封，并将其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需标记医疗垃圾信息。实验结束后，生物安全柜以及实验室均要进行紫外灯照射消毒，时间至少30min。

实验操作人员，应有他人用0.5-1%的有效氯消毒剂或75%乙醇对一次性隔离衣均匀喷雾消毒处理，而后脱去隔离衣将检测医用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人员在离开二级实验室后，应在缓冲区或走廊按顺序摘脱个人三级防护用品，首先应带新的外层手套，摘掉护目镜并置于75%乙醇中消毒，自上而下、自内向外翻转脱掉一次性防护服，脱去外层手套，摘除、一次性帽子、脱一次性鞋套。脱掉手套，病毒防护服均需进行高压灭菌处理。高压前后医疗垃圾严格区分。

病毒相关垃圾需在120度，30min条件进行湿热高压处理，以高压试纸条变色为有效，而后作为普通医疗垃圾处理。

② 核酸检测孵育箱的使用方法

主要分为采样，留样，保存，纯昌塌灭活，检测五步。
操作步骤为：
1、用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5-10次，且不断旋转拭子。
2、需要医务人员进行留样，将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后文即旋紧管盖。
3、保存，将样本管放入密封袋中及时送检，而送检过程中需做圆要严格的运输环境，2-8摄氏度保存。
4、对样品进行灭活处理。
5、将样品放入孵育箱进行检测。
检测前，还需要对病毒迅举进行灭活，这样的作用会使病毒蛋白的结构受到破坏，蛋白不再有生理活性，所以失去感染、致病和繁殖能力，但是常规的灭活不影响病毒蛋白的一级结构，意思就是病毒蛋白的序列没有变化。四步操作核酸提取，将灭活病毒后的样本进行核酸提取，用于后续检测，可以采用自动化的设备，如核酸提取仪等。五步荧光PCR核酸检测，也就是上机器检测，将提取物进行荧光PCR扩曾反应，需要70-80分钟。

③ 核酸检测具体步骤

1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方档仔态法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片戚粗段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

(3)核酸提取仪器怎么启动扩展阅读：

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能行源确定本产品的阳性判断值。

④ 全自动核酸提取仪第一步到2分组5秒时机器故障不运行

全六种黑山提起你第一不到两分纸五秒系机器故障不运动不运行应该他害羞时间短了直接同意点就回运行

⑤ 全自动核酸提取仪程序设置都是统一的吗

全自动核酸提取仪程序设置都是统一的。全自动核酸虚饥提取仪应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸提取工作，基于磁珠法原理，采用旋转式核酸提取技术。广泛应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全郑誉誉、法医学鉴定、环境喊段微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。

⑥ pcr核酸检测是什么意思方法及步骤

核酸检测是目前全球用来对是否携带新冠病毒进行确定的一种有效方式。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗体血清lgm进行参考。但是根据最新的新加坡入境要求是进行pcr核酸检测，那么pcr核酸检测是什么意思呢？

pcr核酸检测是什么意思

PCR的意思是聚合酶链式反应，能够用来扩增DNA，从而将微量的DNA扩增到能够检测的程度。有些病毒的核酸是DNA，需要采用这个方法进行检测。所以PCR并不是进行的检查，而是检测DNA的一种方法。比如乙肝病毒DNA定量，用的就是这一种方法。检查DNA的目的，一方面是可以诊断疾病，如果连病原体的DNA都能检测到，就说明感染了这种病原体;另一方面是判断病毒复制的多少，从而判断病情严重程度或者治疗效果。

pcr核酸检测方法与步骤

进行核酸检验，需要经过取样、留样、留存、核酸提取、上机检测五个步骤。

核酸检测的第一步就是采集人体分泌物，用鼻试子或咽试子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧咽扁桃体处。

第二步医务人员进行留样，将试子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖。

第三部要将样本放入密闭袋中，保存好并及时送检。

第四步将样本送进实验室，提取核酸。

第五步，将提取物进行荧光PCR扩增反应。

核酸是什么

核酸(nucleicacid)，是一类由核苷酸(nucleotide)构成的生物大分子，分为核糖核酸(ribonucleic
acid，宴前者RNA)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid，DNA)两类，其中RNA多为单链结构，DNA多为双链结构。除朊病毒(prion)外，核酸是构成生命所必需的生物大分子，其主要作用是构成生命体的遗传信息载体，除此之外，还有部分核酸可作为及参与构成具有生物活性的酶分子或晌薯其他分子机器
。

核酸检测是什么

核酸检测顾名思义就是针对核酸开展检测。

核酸检测有何独特的优势呢?为何能作为新冠病毒确诊的“金标准”呢?

其实每一种检测方法都有其擅长的应用场景。以病毒检测为例，通常的免疫学检测方法(胶体金、ELISA、化学发光等)的检测对象是病毒的抗原或抗体，相当于“侧面描绘”。由于从感染到可检测存在一个时间窗口期，因此免疫学检测方法一般不合适作为早期诊断。

假阳性与假阴性

1、假阳性

假阳性通常比较少。一般实验室人员操作不当会导致样本间交叉污染或扩增产物的遗留污染，该种情况下可能会导致假阳性。

不过假阳性可以通过严格控制检测流程、以及执行若干个阴性样本随机参与检测的策略而有效规避。

2、假阴性

在这里需要说明的是，PCR检测的假阴性与临床的假阴性实际上不是一个概念。

以网络上激烈讨论的新冠病毒的诊断为例，临床假阴性是指临床症状和影像学高度疑似被感染、但PCR检测却多次或始终为阴性的情况;而PCR检测假阴性是指所采集样本中存在足够量的新型冠状病毒但却没有检出悔简的情况。

避免核酸检测的假阴性，主要需要解决：(1)被感染者的细胞中有足量的病毒、(2)采集样本中可以采集到含有病毒的细胞、以及(3)检测出样本中的病毒这三个环节。

其中PCR试剂盒的技术参数优劣主要影响第三个检测环节。

仅针对第三个检测环节，若样本中病毒数量低于一个程度(低于最低检测限)，PCR试剂盒就无法检出。从这个角度看，PCR检测的假阴性是无法完全避免的。这也是为何需要补充开发病毒的特异抗体检测的原因所在。

沈阳PCR核酸检测实验室

实验室建设坚持高标准、严要求，严格按照国家《医学生物安全二级实验室建筑技术标准》进行建设，建设面积100余平方米，分为试剂贮存和准备区、标本制备与提取区、扩增和产物分析区三个区域。实验室内配置全自动核酸提取仪、实时荧光定量PCR仪、扩增仪、高压灭菌器、B2型生物安全柜、超净工作台、超低温冰箱等仪器，消毒和防护设施齐全，符合相关生物实验室安全标准。为防止实验室外的区域被污染，实验室的气压均为负压，有效降低感染风险。此外，实验室配备了污水处理系统，达到了废液的合理排放和处理。

*目前我国多地区建设了PCR核酸检测实验室用以进行新冠病毒核酸检测

⑦ 全自动旋转式核酸提取仪的工作原理是什么

以磁珠为载体，利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸，在低盐高pH值下与核酸分离的原理，

⑧ 从核酸采样到出结果，中间需要经历哪些过程

01、采样

首先我们得到指定的地点去进行核酸的采样，在做核酸采样时需要注意排队的间距，一般间距都要达到一米以上。现在正常情况下都是采集咽拭子，但情况特殊的时候也会直接捅鼻子。

06、上机检测

检测的时间大概是在一个小时到两个小时之间，仪器启动扩增程序之后，不可以中途停下来添加新的样本。所以一般都是要等到同一批的结果扩增结束之后，才可以进行下一批的扩增。当扩增结束之后，检测结果自然也就出来了，这个时候我们就可以取到自己的核酸检测报告。

⑨ 核酸提取仪的主要步骤及方法

1. 环境温度：5℃～40℃；环境相对湿度；电压：50%~80%范围：100～240Vac，50/60 Hz。
2. 将仪器放在水平实验台上。
3. 放置仪器时应保证仪器周围10cm内无障碍物；多台仪器同时使用时，每台仪器之间的距离应不小于50cm。
4. 仪器主机通电之前，必须先用六角扳手取下磁棒架固定螺丝，否则通电运行将会损坏仪器。
5. 96孔板和磁力棒套的安装必须与对应的卡槽完全契合。
6. 请勿将该仪器安放在过度潮湿、高温或阳光直射等温度变化剧烈的区域，这可能会影响仪器的性能。
7. 请勿和其它大功率器件如离心机、空调等共用同一电源插座以免电源电压波动影响系统运行。
8. 请将适配器连接到仪器，把适配器与电源插座相连，并打开仪器开关。
9. 请勿在有潜在有害液体或气体的环境中操作该仪器。
10. 本仪器详细操作步骤，请参阅以下的说明。
1.5注意事项
1. 仪器应放在湿度低、灰尘少并远离水源的地方，室内应通风良好，仪器后方勿紧靠墙壁或堆放其他物品，以免影响散热。
2. 实验运行过程中禁止直接关闭电源开关。如果需要提前停止实验，请先在触屏软件上点击停止运行并确认后再关闭电源。
3. 裂解孔、洗涤孔和洗脱孔的样本体积应在50μL-1000μL，避免体积过多，溢出孔位。
4. 机器运行及测试进行时，请勿触摸加热条，以免烫伤。
5. 紫外灯开启灭菌时，请勿直视紫外光。
6. 移动仪器之前，请先切断电源，再用螺钉固定磁棒架。
7. 仪器长期不使用时，请拔掉插头，并用软布或塑料袋覆盖仪器，以防止灰尘进入。
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BioG全自动核酸提取仪

⑩ 核酸提取仪原理

1. 根据仪器型号大小不同划分 [1] 
1) 自动液体工作站
自动液体工作站是功能非常强大的设备，液体分液、吸液等自动完成，甚至能通过整合扩增、检测等功能，实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用，不太适合常规实验室提取核酸，一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大(至少96个，一般几百个)的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作，需要比较大的资金。
2) 小型自动核酸提取仪
小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊性来达到自动提取核酸的目的，可以在任何实验室得到应用。
2. 根据提取原理不同划分
1) 采用离心柱法的仪器
离心柱法核酸提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法，通量一般在1-12个样本，操作时间和手工提取差不多，并不能提高实际工作效率，且价格昂贵，不同型号仪器的耗材也不能通用，仅适合经费充足的大型实验室使用。
2) 采用磁珠法的仪器
以磁珠为载体，利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸，在低盐高PH值下与核酸分离的原理，再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性，所以可设计成很多种通量，既可以单管提取，也可以提取8-96个样本，且其操作简单快捷，提取96个样本仅需30-45min，大大提高了实验效率，且成本低廉，因而可以在不同实验室使用，是目前市场上的主流仪器。

磁珠法核酸提取仪的基本原理
磁珠法核酸提取仪一般分为抽吸法和磁棒法两种 [2]  ：
1. 抽吸法，也叫移液法，是通过固定磁珠、转移液体来实现核酸的提取，一般通过操作系统控制机械臂来实现转移。提取过程如下:
1) 裂解：在样品中加入裂解液，通过机械运动及加热实现反应液的混匀及充分反应，细胞裂解，释放核酸。
2) 吸附：在样品裂解液中加入磁珠，充分混匀，利用磁珠在高盐低PH值下对核酸具有很强亲和力的特点，吸附核酸，在外加磁场作用下，磁珠与溶液分离，利用吸头将液体移出弃至废液槽，吸头弃掉。
3) 洗涤：撤去外加磁场，换用新吸头加入洗涤缓冲液，充分混匀，去除杂质，在外加磁场作用下，将液体移出。
4) 洗脱：撤去外加磁场，换用新吸头加入洗脱缓冲液，充分混匀，结合的核酸即与磁珠分离，从而得到纯化的核酸。