Ⅰ 如何选择酶标仪
2020年,新冠肺炎全球爆发,常规的核酸检测判别是否感染新冠病毒,血清抗体检测则可以揭示中国人群新冠病毒的感染情况,随着疫情防控常态化,大规模血清检测对于监控人群免疫情况十分必要。如此看来,作为酶联免疫检测的核心仪器,酶标仪的采购情况被业内看好。
酶标仪作为一个常用的仪器,其基本功能不外乎一个比色测定,与比色计所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量测定软件功能等方面的差异,当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。那么,实验室在选购酶标仪的时候都要注意哪些关键信息呢?
滤光系统
酶标仪最简单的是用滤光方式来划分。一般来说,可以分为滤光片型和光栅型两大类。也有一些酶标仪里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测,本质上还只是把滤片和光栅放在了一起,并没有使两者糅合而产生新的技术突破。光栅型滤光系统具有使用方便,可以进行光谱扫描,灵活性等优点。当然,滤光片系统也有其显著的优势,例如价格较为便宜,检测灵敏度高,带宽的可选择性,可以进行快速的滤光片切换,可配备有自动加样系统,在化学发光检测中光线的透过率高。目前,滤光片系统应用更广,因为它可以让实验者完成更多的试验。
测定波长
一般酶标仪的测定波长在400~750nm或800nm之间,完全可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP),底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在过氧化氢溶液的存在下,经HRP作用,分别氧化为2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有最大吸收,当pH值降为L 0时,最大吸收波长移至492 nm,同时摩尔消光系数变大,显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数,如果HRP量少,H:O:和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌,使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。因此,450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定最常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,所配备的滤光片均应包括上述两个波长,有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大。除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,其他滤光片可根据自己的需要选择。有时,有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定,故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能,此时需要一个340 nm波长滤光片。此时,酶标仪的测定波长范围就成为340—750nm或800nm。酶标仪有单波长和双波长检测功能。有时使用者不知在什么情况下使用单或双波长检测。所谓的“单波长”就是使用一种对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定;而“双波长”则除了用对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定外,同时用对特异显色不敏感的波长如630 nm进行测定,酶标仪最后打印出来的吸光度则为二者之差。630 nm波长下得到的吸光度是非特异的,来自于板孔上诸如指纹、灰尘、脏物等所致的吸收。因此,在ELISA比色测定中,最好使用双波长,且不必设空白孔。
测定的吸光度范围
通常,酶标仪的吸光度测定范围在0~2.5之间即可以满足ELISA的测定要求。早期的酶标仪可测定的吸光度一般在0~2.5之间,但现在基本上都做了拓宽,可达到3.5以上,并且能保持很好的精密度与线性。因此,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围,主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。
光学系统
酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为8或12通道,亦有单通道)检测,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话,则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。
检测速度
酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快,有利于提高检测的精密度,即避免由于测定过程中,因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。目前市场上常见的酶标仪检测速度都非常快,通常在数秒钟内。
震板功能
酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀,使板孔内颜色均一。目前市场上常见的酶标仪均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调节;有的则较为固定。使用有震板功能的酶标仪,在进行ELISA测定显色反应完成加入终止剂后,可不必振荡混匀,直接放人酶标仪上测定即可。
温育功能
温育功能是指酶标仪本身能按要求自动精确地控制仪器内部的温度,使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成,而无需再外配温箱。目前,只有少部分酶标仪具有此种功能,温育功能只是酶标仪的一个附加功能,是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择,则可根据自己实验室的条件及需要来决定。
软件功能
软件功能是指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其他测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等数据的统计分析并报告结果的功能。软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。如果硬件方面区别不大,则软件就成为判定酶标仪优劣的惟一指标。对于用户来说,好的软件功能,对实际工作会有较大的帮助。ELISA定性测定,酶标仪如具有阳性判断值(cut-off)及其测定“灰区”(即指测定吸光度处于cut—off周围的一定区域,此区域内结果应为“可疑”)的统计计算功能,不但方便了实验室工作人员,而且在某些特定的情况下,有很高的实用价值。因此,如目的是定量测定,则在酶标仪的软件功能中,最好要有这种曲线回归方程计算分析功能。其他诸如连点、直线等回归计算,则可根据酶标仪的应用目的而定,如兼用于微量生化测定,则此类回归计算就很有必要。此外,酶标仪兼做酶标动力学、凝集反应测定所需的软件是否应具备,当然也应根据使用目的而定。由于此类软件一般都较为昂贵,酶标仪常另外单独按需配备,如果不是实验室特殊需要,就不必强求这种软件功能。
语言界面
通常进口的中高档酶标仪人机对话多采用英文。这对于某些基层实验室可能会存在语言方面的困难,从而难以最大限度地发挥酶标仪的作用。为解决这方面的问题,已有一些酶标仪采用了中文界面。这样就大大方便了广大基层实验室技术人员的使用。综上所述,尽管酶标仪的发展极为快速,种类繁多,功能也不断加强,但其最根本的功用是不变的,即比色测定。大凡比色测定,其基本要求就是在一定吸光度范围内要有好的测定准确性、线性和精密性。同样的吸光度范围,测定的准确性、线性和精密性越好则酶标仪亦越佳。而且,由于用于酶标仪比色测定的为多孔(通常为96孔)微孔板条,为保证测定的孔间重复性,则测定速度也是一个较重要的性能指标。至于其他如震板、温育及有关的软件功能,则是选配功能,不影响酶标仪其他的使用性能。答案来自
Ⅱ 核酸检测用什么仪器检测
数字式PCR仪。
能将每个样品的反应体系分为12000个—20000个纳升级的微滴。微滴生成速度:8个样品:3分钟。微滴分析仪可一次检测96个样品,全自动检测,无需人工干预。具有温度梯度功能,可进行96个样本扩增,升降温速度可达5度每秒。
检测原理
所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒,病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物。新型冠状病毒出现后,中国科学家在极短的时间里完成了对新型冠状病毒全基因组序列的解析。
并通过与其它物种的基因组序列对比,发现了新型冠状病毒中的特异核酸序列。临床实验室检测过程中,如果能在患者样本中检测到新型冠状病毒的特异核酸序列,应提示该患者可能被新型冠状病毒感染。
Ⅲ 伊鸿健康掌中测是干什么用的仪器能检测哪些
掌中测是一款智能诊断设备,我们诊所使用掌中测胶体金试纸分析仪快一年了,可以检测CRP、SAA、肺炎支原体/衣原体、幽门螺旋杆菌、糖化血红蛋白、手足口病、甲乙型流感等,一般半小时内就能检测出准确的细菌感染、病毒感染等单位,辅助我们医生精准用药,病人也非常认可,而且诊所医生也可获得更多的服务收入很好。
Ⅳ 如何利用电镜技术测定病毒粒体的特征
随着科学的发展,电镜已成为一种综合的分析仪器,在植物病毒的诊断和鉴定中发挥着重要作用。植物病毒学上用得较多的是透射电镜。
1 透射电镜的成像原理
显微镜的分辨率与其使用光源的波长呈负相关,即波长越短分辨本领越大。可见光的波长范围为0.4~0.7μm,它决定了光镜的分辨极限为0.2μm,有效放大倍数不能超过2000倍。电镜用的光源为电子枪产生的高速电子束,其波长比可见光短十万倍以上,因而大大地提高了分辨率。电镜分辨率接近0.lnm,有效放大倍数在百万倍以上。
在电子显微镜下可观察病毒粒体外形、大小以及在寄主细胞中的位置等。植物病毒粒子常见的有球形、长杆状、线形和弹状。
2 制样技术
样品处理技术多种多样,适用于不同的材料和观察目的。如金属投影和复型技术,主要用于病毒或其他大分子的表面结构和大小观察;冰冻蚀刻用于细胞化学、生物膜等研究;另外还有放射自显影电镜技术、免疫电镜技术等。而植物病毒学上广泛应用的是负染技术和超薄切片技术。负染制样操作简单,所需时间少;而超薄切片制样方法操作复杂,所需时间长,但这种方法可以观察到病毒粒子在组织中的情况。
2.1 负染技术
负染是相对正染而言的。是指在样品的周围包被高电子密度的染料,背景呈深色,而样品呈白色,反衬出样品的轮廓。病毒负染后能很清楚地看到其大小和细微结构。此法简便、易行、快速,为病毒诊断提供了一种可靠手段。现在鉴定病毒,一般先用病汁液做负染观察,根据看到的病毒的大小和形状等,能为进一步研究提供许多有用信息,如采用什么方法提纯、病毒的分类地位如何等。其中有六个病毒属的形态特征非常典型,几乎可以凭此特征就能确定它们属于哪个病毒科、属,见表1。
表1 六个典型特征病毒属
pH调节用1mol/L HCl或1mol/L NaOH,而钼酸铵用醋酸铵调,甲酸铀用氢氧化铵调。
强大电子束的轰击,是造成病毒变形和失去结构细节的另一重要原因,观察时要采用尽量低亮度光斑,动作迅速,以减少轰击时间。Forvmor膜等在电子束照射下,容易漂移,这样病毒会被拉长或拉宽,因此,在测量病毒颗粒大小等精确观察时,最好使用碳膜,或在Forvmor膜上加喷一层碳膜。
(5)病毒粒体大小测量 目前病毒学工作者已经注意到,同一病毒的大小不一样,有些甚至相差甚远。这可能是由于不同分离物或不同株系本身就不同,但大部分可能是由于实验误差或方法上的差别造成的。测量病毒大小,一般不宜提纯病毒,而要用病株粗提液。因为病毒在提纯过程中的形态结构,会由于提纯过程中离子环境等的变化和物理因素的影响发生而变化。染色要用两种以上染料,测量病毒颗粒的数量要尽量多,尤其是线状病毒容易断裂,数量应在100个以上。
2.2 超薄切片技术
根据电镜成像原理可知,用于电镜观察样品其厚度要求在数十纳米,而通常单个细胞的厚度在数十微米,比要求厚度大100倍,而徒手切片或用于光镜的切片机,其切片厚度一般在单个细胞水平,所以电镜观察必须做超薄切片。
超薄切片一般程序为:取材—固定—脱水—包埋—切片—染色—电镜观察。
(1)取材 取材要求典型、迅速,机械损伤小。材料切成1mm3大小,离体后1min之内进入固定液。应取不同寄主材料、同一寄主的不同组织和不同接种时期的样品。
(2)固定 是用物理的或化学的方法迅速将细胞杀死,并且尽可能地使保存和固定细胞内各种结构、生物大分子生活时的状态和位置。电镜中常用的固定方法是化学固定。常用四氧化锇、戊二醛、高锰酸钾或重铬酸钾等固定剂。在病毒学中一般采用2%~3%戊二醛—1%~2%四氧化锇(用0.2mol/LPBS,pH7.2配制)双固定法,这样细胞中的多种成分,如蛋白质、脂类、多糖、核酸等,大部分都能固定下来。戊二醛固定12~24h,四氧化锇固定2~4h。戊二醛遇到锇酸会形成沉淀,因此戊二醛固定后一定要用缓冲液充分清洗后再进行四氧化锇固定。固定在超薄切片中很关键,固定液的种类、浓度、pH、渗透压、离子组成、固定时间、温度和方式都与固定的质量密切相关。因此,整个固定过程应该在4℃下进行。固定剂一定要用缓冲液配制。固定好的材料,电镜下细胞内各种膜系统应该完整,没有断裂,双层膜要基本平行,细胞质呈精细颗粒状,没有空白。固定后缓冲液要充分清洗后再进行下面的步骤。
(3)脱水 常用的包埋剂是疏水的,因此包埋前要用既亲水又亲脂的乙醇或丙酮进行脱水。从低浓度到高浓度的脱水剂脱水,最后用绝对无水的脱水剂脱水。
(4)包埋 包埋的目的是增强样品的机械强度,使样品具有一定的机械形状,适于切片机工作;另一个重要作用是进一步固定细胞结构。包埋剂种类很多,有水溶性的,也有脂溶性的。常用的是Epon812等环氧树脂。包埋过程中发生的化学反应,叫聚合过程。聚合过程中实际上发生了两类反应,一类是环氧树脂末端环氧基之间在胺类化合物(如DMP-30)催化下,化合生成长链;另一类是树脂中间的羟基和交联剂(也称固定剂)的酸酐发生反应,生成横向连桥,加固了树脂分子之间的联系。为了增强树脂聚合形成的包埋块的切割性能,常加入一些增塑剂,如树脂、催化剂、固化剂。
(5)切片 准确、熟练地掌握切片机操作技术,包埋块软硬适度,修块好,就能切出要求质量的片子来。这里技巧很重要。
(6)超薄切片的染色 也叫电镜技术的正染色。观察内容不一样,采用染色方法不同,病毒内含体和细胞病理学研究则常用醋酸双氧铀—柠檬酸铅染色法。切片在1%~2%醋酸双氧铀中染色20min,用50%乙醇冲洗后用柠檬酸铅染色30min,0.01mol/L NaOH冲洗。染色的关键是要防止醋酸铀和柠檬酸铅生成沉淀。防止污染的主要措施是防止CO2和柠檬酸铅反应。如用刚制备出的蒸馏水配制染料和冲洗剂,染色时在小室中进行,小室中放入吸收CO2的固体NaOH,防止人呼吸时CO2进入小室中,戴口罩等。染色和冲洗完毕,切片自然干燥后就可以电镜观察。
电子显微镜的出现及各种电镜技术的发展,为植物病毒的直接观察起到了巨大的推动作用,使检疫工作人员能得到受病毒感染的病毒粒子电镜照片以作为直接证据。但电镜观察结果需要和其他方法的检测结果相结合,才能确定病毒的分类地位。这是因为许多病毒都有类似的形态和结构。由于一些植物汁液中病毒浓度过低,在进行常规的电镜观察检测中,很难发现病毒粒子,这样就要求对一些植物病毒进行分离和提纯,以便进行有效的电镜观察和其他理化检测。病毒的分离和提纯主要是采用差速离心、PEG沉淀的方法,进一步的纯化则采用密度梯度离心和柱层析法。为了直接检测植物体内的带毒情况,常采用植物组织的超薄切片和电镜观察进行。超薄切片的电镜观察可以直接用于对植物组织内部的病毒形态、内含体形态、病毒所在的部位、受感染的植物组织发生的病理学变化等进行检查。
Ⅳ 我们观察病毒,应选用的仪器是()A.放大镜B.光学显微镜C.电子显微镜D.解剖显微
病毒是一类比细菌还要小的微生物,形体及其微小,放大镜和光学显微镜放大倍数太小,不能观察到病毒而解剖显微镜能形成正立像,立体感强.常常用在一些固体样本的表面观察,或是解剖、钟表制作和小电路板检查等工作上,也不能观察到病毒,通常只能借助于电子显微镜才能观察到它们.
故选C
Ⅵ 南美白对虾养殖中pcr技术是什么概念
首先,PCR是一台仪器及反应机理的一种统称,一般用作病毒检测仪器,并不代表是什么技术。专业点的说法:PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
在对虾生产中,PCR主要用于检测对虾在虾苗期间、养殖中后期的白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、肝胰腺细小病毒(HPV)、桃拉综合征病毒(TSV)、对虾杆状病毒(BP)和传染性肌肉坏死病毒(IMNV)的检测,提前预防或及时治疗。