❶ 检验大肠杆菌
一、细菌的分离鉴定
1、标本:肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等,腹泻者取粪便。
2、分离培养与鉴定:粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌,再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。
37℃孵育18~24小时后,观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外,还应计数,每毫升尿含菌量≥100,000时,才有诊断价值。
二、卫生细菌学检查
大肠杆菌不断随粪便排出体外,污染周围环境和水源、食品等。取样检查时,样品中大肠杆菌越多,表示样品被粪便污染越严重,也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
1、细菌总数:检测每毫升或每克样品中所含细菌数,采用倾注培养计算。中国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2、大肠菌数指数:指每立升中大肠菌群数,采用乳糖发酵法检测。中国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群;瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
三、全自动微生物定量分析仪(TEMPO)检测
全自动微生物定量分析(TEMPO)仪的大肠杆菌群计数检测有TC和CC两种方法。TEMPOTC的开发是为了获得NFISO4832标准相当性能水平。
TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群的方法。该法是为了获得和AOAC官方方法966.24及美国公共健康联合会检测乳制品检测方发(SMEDP)一致的效果。TEMPO系统根据阳性空的大小和数目来推算出原始样本中大肠杆菌群数目。
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(1)肠道致病菌用什么仪器检测扩展阅读:
多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法,这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h,而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶,从而释放出荧光产物,进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。
此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。
一般涉及以下试验:首先是发酵,在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵;然后是分离培养试验,利用伊红美蓝培养皿分离;接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵,最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。
多管发酵法对试验条件要求不高,成本低,但是检测时间较长,容易受其他条件干扰,进而影响到测定结果的精确度。
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❷ 大肠菌群检测方法
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中的规定操作步骤:
1、乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
2、分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18-24h,观察菌落形态。
3、证实试验:挑取平板上的可疑菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h,观察产气情况。
SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》规定操作:
1、推测试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
2、证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中,36±1℃培养48±2h,观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表,报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的,主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在,因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
❸ 评价食品卫生质量的细菌污染指标及检测方法
食品中的细菌(包括非致病菌、 条件致病菌和致病菌),有些是造成食品腐败变质的直接因素。因而常把污染食品的细菌总数、大肠菌群或大肠杆菌、肠球菌作为评价食品卫生质量的重要指标。 细菌总数,是指该食品上每个活菌细胞在培养基上生成肉眼可见的菌落。即菌落总数来表示。这种“细菌总数”实际上仅指活的杂菌,它可以作为食品污染的程度和新鲜度指标,是判断食品卫生质量的一项重要依据。 大肠菌群或大肠杆菌:大肠菌群以大肠杆菌为主,包括产气肠细菌和一些中间类型的细菌。大肠菌群来自人和温血动物的肠道,一般无病原性。据估计,成人每日从粪便中排出的大肠菌群细菌多达每克粪便中含有1千万≈1万万个。若水或食品中发现大肠菌群的细菌,则表示水或食品被人和温血动物粪便所污染,而有粪便的污染就可能有肠道病原菌(伤寒杆菌、痢疾杆菌等)。因此大肠菌群或大肠杆菌可以作为肠道致病菌污染食品的指标菌。食品中大肠菌群的污染程度常用菌量表示。 肠球菌:肠球菌是链球菌属中一群革兰氏阳性球菌,呈长链状或短链状。与食品有关的链球菌,主要是粪链球菌和粪渣链球菌。肠球菌主要来源于粪便。过去和现在,大肠菌群或大肠杆菌长期以来作为粪便污染的指标细菌,广泛应用于一-般食品的常规细菌检验。但是这类细菌是嗜温菌,在低温、冰冻状态下容易死亡,这就降低了它应有的指标作用。将具有抵抗冰冻力的肠球菌作为指标细菌,用于冷冻食品的细菌检验,指标效果要优于大肠菌群,但检验方法要复杂得多食品卫生标准中,这三种不同的细菌指标,其卫生学意义不同,它们既有联系,又有区别,应根据实际情况加以应用,以对食品卫生质量作出正确的判断。针对这一系列食品安全卫生标准检控,冠宇仪器微生物致病菌检测箱是我公司根据市场需求设计的一种专门针对微生物致病菌研制的检测箱,箱内配有齐全的采样工具、各类细菌类检测速测盒(菌落总数测试片、大肠杆菌大肠菌群测试片、食品大肠菌群测试片、餐饮具大肠菌群检测是纸片、霉菌、酵母菌测试片、沙门氏菌测试片、金黄色葡萄球菌测试片、大肠杆菌O157测试片、副溶血弧菌测试片、阪崎肠杆菌测试片、蜡样芽胞杆菌测试片、水中大肠菌群检测试剂盒等)、以及加厚铝合金外框,坚固耐用满足食品微生物采样检测需求。❹ 食品微生物检验(菌落总数、大肠菌群、致病菌)应在什么实验室中检验
(1)大肠杆菌培养过程要考虑:营养条件、温度、酸碱度等条件.大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、繁殖快等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料.(2)微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养皿进行灭菌.紫外线能使蛋白质变性,还能损伤dna结构,故用来消灭空气中细菌.(3)稀释涂布平板法计数活菌的个数,要对待测样品适度稀释,避免菌体重叠,影响计数.(4)可以根据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定或分类.(5)使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散,造成细菌污染.
故答案为:(1)温度
酸碱度
生活周期短
(2)灭菌
损伤dna结构(3)适度(4)鉴定(分类)(5)灭菌
❺ 超纯水中的细菌含量用什么仪器检测
纯净水设备产水水质是比较重要的,但是有时候会出现纯净水细菌滋生的情况,那么纯净水设备如何检测是否有细菌滋生呢?常见的有三种方法:
一、经典微生物培养法:微生物培养法的要素包括:培养基的类型、培养温度和培养时间。培养方法包括:烧注皿培养法、铺平皿法、膜过滤法。
二、仪器法主要有:显微镜直接计数法、放射法、阻抗法以及多种生化方法。
1、优点是精度好,准确度高,能够在较短时间内获得检测结果, 有利于进行及时控制。
2、缺点是需人工处理样品,工作量大,样品处理量小,易受仪器等其他方面的制约,并且仪器法对微生物是破坏性的,它无法对污染菌作进一步的分离和鉴别。
三、常规方法:微生物的鉴别是一项专业性很强的工作,需大量工作经验及专业知识。
掌握纯净水设备细菌检测方法,足以能够看出各种不利于设备产水标准的现象,检测出危机产水质量的污染细菌种类,保证用户能够及时解决问题,结合纯净水设备运行条件保证系统产水稳定、可靠。
❻ 水中余氯检测
余氯是指水与氯族消毒剂接触一定时间后,余留在水中的氯。余氯有三种形式:
1. 总余氯:包括游离性余氯和化合性余氯。
2. 游离性余氯:包括HOCl及OCl-等。
3. 化合性余氯:包括NH2Cl、NHCl2、NCl3及其它氯胺类化合物。
余氯的作用是保证持续杀菌,也可防止水受到再污染。但如果余氯量超标,可能会加重水中酚和其它有机物产生的味和臭,还有可能生成氯仿等有"三致"作用的有机氯代物。测定水中余氯含量和存在状态,对做好饮水消毒工作和保证水卫生学安全极为重要。余氯的测定方法很多。本公司目前采用下述三种测定法:
一、便携式DPD余氯测定仪(Pocket Colorimeter Chlorine,Hach Company)
1. 应用范围
⑴.本法适用于分别测定生活饮用水、水源水、废水及海水的游离余氯、总余氯及化合性余氯。
⑵.水样有色或浑浊,可作空白调零以抵消其影响。
⑶.本法最高检测浓度为4.5mg/l有效氯。
2.原理
水样中不含碘化物离子时,游离性有效氯立即与DPD试剂反应产生红色,加入碘离子则起催化作用,使化合氯也与试剂反应显色。分别测定其吸光度,得游离氯和总氯,总氯减去游离氯得化合氯。
3.干扰影响
⑴.水中存在大于250mg/l碱度或150mg/l酸度,如CaCO3等将抑制所有颜色发展或颜色将立即褪色。用1N的H2SO4或1N的NaOH中和这种样液到pH6-7。
⑵.一氯胺将逐渐造成游离氯读数增加。在一分钟内读数,每3.0mg/l一氯胺将使游离氯读数增加0.1mg/l.。
⑶.溴、碘、臭氧和锰、铬的氧化物会增加游离氯的读数。
⑷.为了减小Mn4+和Cr6+的影响,如上述⑴调节pH值到6-7。取25ml水样,加3滴30g/lKI溶液,混合等待一分钟。加3滴5g/lNa2AsO3混合(另据《水和废水标准检验法?第15版》可用0.25%硫代乙酰胺溶液代替亚砷酸钠,每100ml水样加0.5ml 0.25%硫代乙酰胺)。如果铬存在,在两种分析中会与DPD发生反应,读数。再从最初分析得到的氯的读数减去这个读数。
二、邻联甲苯胺比色法(OT法)
1.应用范围
⑴.本法适用于测定生活饮用水及其水源水的总余氯及游离性余氯。
⑵.本法最低检测浓度为0.01mg/l余氯。
2.原理
在pH值小于1.3的酸性溶液中,余氯与邻联甲苯胺反应,生成黄色的醌式化合物,用目视法进行比色定量,还可用重铬酸钾-铬酸钾溶液配制的永久性余氯标准溶液进行目视比色。
3.干扰影响
水中含有悬浮性物质干扰时测定,可用离心法去除。其它干扰物质的最高允许含量如下:高铁,0.2mg/l;四价锰,0.01mg/l;亚硝酸盐,0.2mg/l。
三、在线式电化学分析余氯仪(1870E Resial Analyzer,The Capital Controls Group)。
1. 应用范围
本法适用于测定生活饮用水、废水、冷却水和其它水的总余氯、游离氯、氯化溴、溴和碘。
2. 原电池原理
在原电池中,通过测试其中的电流能检测出离子浓度的变化。瓶中的电流与氯离子浓度的变化成一定比例。
原电池中的阴极为金属金。当溶液中存在次氯酸(或次氯酸离子)时,阴电极发生化学反应,产生氯离子。
HOCl + 2e- ←→ Cl- +OH-
阳极为金属铜,当电极发生反应时,氧化产物保留在阳极上。这时,磨蚀机(清洁球不断搅拌)会配合着去除金属表面的氧化产物。
原电池中的电流受pH值变化的影响大。在pH4.0-4.5时瓶中电流很稳定。因此,用pH缓冲液来稳定电流。如果以CO2为缓冲液,pH值可调到5.5-6.0。加KI时,反应生成的总游离碘相当于参加反应的总余氯,从而测定总余氯。
3. 干扰影响
⑴.温度和pH值的变化将会影响仪器的准确度。因而采用热变电阻器补偿水样的温度变化和填加pH缓冲液来调整pH值以克服这两种因素的影响。
⑵.没有迹象表明锰、铬、亚硝酸盐等的存在会产生干扰影响。