㈠ 采用流式检测方法中哪种仪器可以检测到外泌体的细小颗粒
运用流式检测方法的有很多种检测仪器,其中纳米流式检测仪是相对于其他仪器检查中检测精度最高也最精确的一款仪器,对外秘体及细胞外囊泡、细菌病毒都有很好的检测效果。而这个仪器是厦门一家公司研发生产。
㈡ 四色通道的流式细胞仪如何测多个细胞因子
每个抗体分别标记不同的,你机器可别识别的荧光染料。细胞固定,通透后就可检测了。要有严格的对照。你如果问的再具体点,我可以给你提供指导。
㈢ 测细胞因子含量常用的 elisa 方法为
有一个朋友来找我咨询用流式检测细胞因子的问题,他之前用ELISA 检测细胞因子的话,发现样本量需求很多,然而有些样本量又比较少怎么办呢,那么接下来我来对比几种检测细胞因子的优缺点,供各位大大们阅读参考啦~
细胞因子(cytokine,CK):是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成(一般是免疫细胞)、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动,在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。
细胞因子的作用方式:自分泌作用、旁分泌作用、内分泌作用。
细胞因子的作用特点:多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性。
根据产生细胞因子的细胞种类不同分类:白细胞介素(interleukin, IL)、干扰素(interferon, IFN)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、转化生长因子-β家族(transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF)、趋化因子(chemokinefamily)、生长因子(growth factor,GF)等。
细胞因子的检测方法一般分为生物学、分子生物学测定法及免疫学(重点介绍)
1、生物学测定法 其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。
2、分子生物学测定法 目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。
3、免疫学检测法 其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、ELISA法、免疫印迹法和流式细胞仪等均已用于细胞因子的检测。
细胞因子的检测方法对比
1、酶联免疫吸附实验(ELISA)
原理:使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。由于酶的催化频率很高,故可放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
优点:避免特异性抗体直接标记,便宜。
缺点:所需样本量多、每次仅能测定一项细胞因子、操作步骤和测定时间过长、酶联反应所致的人工假象
2、流式细胞仪(CBA)
原理:利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物,并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光,从而测定待测物的数量。
优点:所需样本量少、快速(实验6-8h可以完成)操作简便、灵敏度高、重复性好、高效(同一个样品可以同时检测多个因子)、安全、接近生物体的分析条件(全血检测保留细胞及生化微环境更准确反应了体内状况)。
㈣ 检测方法:LIA. TBA. CBA分别是什么方法,请教一下
摘要 CBA:利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物,并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光,从而测定待测物的数量。
㈤ 请问Luminex与CBA有何区别
博凌科为生物科技-为你解答:Luminex与CBA的比较Luminex和CBA是两种最近几年来比较热门的检测细胞因子的技术,两者之间的大致区别: CBA: 可在流式细胞仪检测。 可同时检测一个标本中的6-8种细胞因子 可检测50ml的标本(上清液) 检测范围:0-5000 pg/ml Luminex: 只能运行在Luminex机器上(or Bioplex from Biorad) 可检测20-22种细胞因子 可检测25-50 ml的标本 检测范围:0-1667pg/ml
㈥ 纳米粒子能够在流式细胞仪中表现出来吗
观察纳米粒子需要特殊的手段。如果用流式观察,需要先用定制的微球珠吸附后,在通过抗体染色,可以观察到。
另外就是使用特殊的仪器,比如nanosight,可以直接观察到
㈦ CBA法检测原理
CBA能够基于应用层智能地过滤TCP/UDP包,甚至过滤的连接可以从被保护的网络发起.所以CBA可以检测防火墙任意一边发起的流量.
㈧ 用流式细胞仪检测细胞凋亡
请看维基网络相关记述:
流式细胞术
维基网络,自由的网络全书
(重定向自流式细胞仪)
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Image:03wiki-zn-frontpage-icon.gif流式细胞术正在翻译。
目前已翻译90%,原文在en:flow cytometry。希望您积极翻译与修订。
流式细胞术(英文flow cytometry)是一种生物学技术,用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。
目录
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* 1 原理
* 2 流式细胞仪(flow cytometer)
* 3 应用
* 4 参见
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原理
一束单色光(通常是激光)照到流体力学聚焦的一股流体上。若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点,其中一个和激光在同一直在线(称作前散射(FSC)),其它几个和激光垂直(旁散射(SSC)和一个或几个荧光监测器)。当每个悬浮颗粒通过光束时会按某种方式把光散射,同时所带有的荧光化合物被激发并发射出频率低于激发光的荧光。这些散射光和荧光的组合数据被检测器记录,根据各检测器亮度的波动(每个细胞会显出一个散射或荧光的峰)就能够推算出每个颗粒的物理和化学性质。前散射与细胞体积相关,而旁散射取决于颗粒的内部复杂程度(比如核的形状、胞质内颗粒的种类或者末的粗糙程度)。
可以检测的参数有:
* 细胞的体积和形态复杂程度
* 细胞中的色素
* DNA(细胞周期分析、细胞动力学、细胞增殖等)
* RNA
* 染色体分析和分选(文库构建、染色体涂染)
* 蛋白质
* 细胞表面抗原(CD标记)
* 胞内抗原(各种细胞因子(cytokine)、次级媒介等)
* 核抗原
* 酶活性
* pH,胞内离子化的钙、镁,膜电势
* 膜流动性
* 细胞凋亡(apoptosis)(定量检测DNA降解、线粒体膜电位、通透性变化)
* 细胞存活能力
* 监测细胞电通透性
* 氧爆作用(oxidative burst)
* 研究癌细胞中的多重耐药性(multi-drug resistance, MDR)
* 谷胱甘肽
* 各种组合(DNA/表面抗原等等)
这个列表非常长,而且在不断地扩展。
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流式细胞仪(flow cytometer)
流式细胞仪又称荧光激活细胞分选器、荧光活化细胞分类计(FACS,Fluorescence Activated Cell Sorter)。
现代的流式细胞仪每秒可以实时检测几千个颗粒,并且可以主动分离具有不同特性的颗粒。
流式细胞仪和显微镜比较像,但能够对大量的单个细胞利用一组参数进行高通量的自动量化。固体组织需要在检测前制备成单细胞的悬浮液。
一个流式细胞仪包括五个组成部分:
* 细胞流动系统:液流(鞘液(sheath fluid))携带细胞,使颗粒以串流形式通过光束。
* 光源:有通常的灯(汞或氙)、高功率水冷的激光源(氩、氪、染料激光)、低功率气冷激光(氩(488nm),红氦氖(633nm),绿氦氖,氦镉(紫外))、偶极激光(蓝、绿、红、紫)。
* 检测和模数转换(analogue-to-digital conversion, ADC)系统:产生前散射、旁散射光和荧光的信号。
* 放大系统,线性或对数放大。
* 计算机,用于分析信号。
早期的流式细胞仪主要是实验设备,但目前仪器和相关的试剂有了很广的市场。不同厂商的仪器特性也不同,主要的厂商和品牌如下:
* Beckman-Coulter (ex-Coulter): Epics XL/XL-MCL; Epics Altra (Hypersort) (IBM-PC compatible platforms)
* Becton, Dickinson: (FACS's): FACSCAlibur, FACScan, FACSort, FASCSVantage (Mac OS platform) FACS Canto, LSRII, Aria, DiVa (PC PLatform)
* Cytomation: MoFlo, Cyan (IBM-PC platform)
* Partec/Dako: Galaxy; PAS; CCA; PA (IBM-PC compatible platforms)
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应用
流式细胞术在很多领域中都有应用,包括分子生物学、病理学、免疫学和海洋生物学等。在分子生物学中,它主要用于荧光标记的抗体。特异性的抗体与靶细胞上的抗原结合,能够通过流式细胞仪研究这些细胞的特别信息。这在医学(尤其是器官移植、血液学、肿瘤免疫学和化疗、遗传学)中具有很广泛的应用。
现代的流式细胞仪具有多个激光和荧光检测器(目前商业用仪器的记录是4个激光和14个检测器),可以用于多个抗体标记,以便在表现型中更准确地区别某个靶群体。
流式细胞仪也是很有用的分选仪器。当细胞/颗粒通过时,可以被选择性地加上某种电荷,并在通过电磁场后偏转,从不同出口流出。这样就可以从一个混合物中高速(理论上可达到每秒大约9万个细胞)准确地分离开四类细胞。
由流式细胞仪得到的数据可以画成一维的柱状图或者二位或者三维的散点图。
The data coming from flow-cytometers can be plotted in 1-D to proce histograms or seen in 2D as dot plots or in 3D with newer software. The regions on these plots can be sequentially separated by a series of subset extractions which are termed gates. Specific gating protocols exist for diagnostic and clinical purposes especially in relation to haematology. The plots are often made on logarithmic scales. Because of overlaping fluorescent dyes, emission spectrum generated interfering signals by detectors signals have to be compensated electronically.
海洋中主要的光合生物之一——占海洋浮游生物总细胞数将近1/3的原绿球藻(Prochlorococcus)就是通过流式细胞术发现的。因为其细胞小,叶绿素含量少,在通常的荧光观察中被迅速漂白(bleach),但由于在流式细胞术中细胞通过光束的时间极短,胞内叶绿素的荧光可被观察到。
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参见
* 荧光显微镜
* 荧光活化细胞分选
取自"http://wikipedia.cnblog.org/wiki/%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E8%A1%93"
页面分类: 待翻译文章 | 细胞生物学 | 实验室技术 | 解剖病理学 | 血液学 | 医学检验
㈨ 如何通过流式细胞术测定炎性因子的量
现在最常用的是采用荧光微球为基础的系统,可以同时检测数十种细胞因子。有好几个厂家都有出品。
比如BD公司出的BD™ Cytometric Bead Array (CBA)
㈩ 流式细胞仪的原理是什么
最近一直在了解流式细胞术和流式分选的知识,看到这个问题想回答一下:
流式细胞仪是以流式细胞术为基础,快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选。分析流程为:制备单细胞悬液,用特异性荧光染料标记的抗体进行染色,经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室,在鞘液的包裹下细胞呈单行排列,依次通过检测区域,在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号,通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号,进行分析。
如上所述,流式细胞仪是由液流系统、光路系统以及检测分析系统三部分组成,部分仪器还具有分选功能,能对粒子进行充电和偏转从而实现细胞分选。
液流系统:通过产生压力使含有目的细胞的样本快速进入仪器,在封闭的样品管中利用样品和鞘液之间的压力差是样本聚集到光学分析系统;
光路系统:由不同的激光器发射出的激光照射到细胞表面产生光信号,而后经过不同的光路系统被接收。在流式照射室的分析点,激光照射到细胞表面发生散射和折射,并发射出散射光包括前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC),同时细胞表面的荧光素被激发发射出荧光。前向散射光和侧向散射光检测器收集散射光转变为电信号;荧光则被聚光器收集,不同颜色的荧光被双色反光镜转向不同的光电倍增检测器,将荧光信号也转变成电信号。FSC和SSC是流式分析中两个非常基本的参数。FSC的值能代表细胞的大小,细胞的体积越大则FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度,细胞内细胞器和颗粒度越大则SSC越大。
检测分析系统:荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度,光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。
流式细胞分选是在流式细胞术的基础上进行的。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体,产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴,待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷(对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷;未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷;而不含有细胞的液滴则不被带电荷),当液滴流经偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不带电荷的液滴落入废液容器,从而实现细胞的分离。
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