1. idexx猪瘟病毒抗体检测试剂盒用的什么抗原
概述
猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻性病毒(BVDV)以及边界病(BDV)都属于黄病毒属的成员。由于CSFV的高致病力和高致死率,它已给养殖业造成了巨大的损失。猪感染高致病力毒株后在潜伏期就可以造成传染,经历急性猪瘟或亚急性猪瘟临床症状的猪在出现症状前大量排毒,但耐过后的猪只体内有明显的CSFV抗体,且不再排毒。感染温和性毒株的猪呈慢性感染,在病死前会长期或间歇性地排毒。怀孕母猪可以通过胎盘感染胎儿导致流产、木乃伊化或产出弱猪、畸形胎等。先天性感染低毒力病毒的结果是产出持续性感染的仔猪,仔猪出现免疫耐受,不表现任何症状向外排毒。猪也有可能感染BVDV或BDV。尽管这些感染通常呈温和过程并且是自限性的,但有效的将它们同猪瘟病毒区分是很重要的。
原理
猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测试剂盒。该试剂盒是用猪瘟病毒抗原包被的微量反应板,利用阻断ELISA原理来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体。如果被检样品中存在猪瘟病毒抗体,它们就会阻断辣根过氧化物酶标记(HRPO)的抗猪瘟病毒的单克隆抗体。单克隆抗体与猪瘟病毒抗原的结合可以通过辣根过氧化物酶与底物的显色程度进行判定,即用酶标仪在单波长450nm或双波长450nm与620nm测定该反应体系的吸光度。当被检样品中含有猪瘟病毒抗体(阳性结果)时,显色就会变浅,当被检样品中不含有抗猪瘟病毒抗体(阴性结果)时,显色就会变深。样本的阻断率可以通过450nm波长样本吸光度与阴性对照吸光度的比值来确定
试剂
一个ELISA反应板可以检测92份样品(另加两个对照,每个双孔),或46个未知样品,每个样品加双孔。双孔检测法有利于检测结果的准确性。
1.用猪瘟病毒抗原包被的ELISA反应板
2.洗涤液(10×)
3.阴性对照
4.阳性对照
5.样品稀释液
6.辣根过氧化物酶标记(HRPO)的抗猪瘟病毒的单克隆抗体
7.TMB底物
8.终止液
自备器材
1.微量移液器,50μl和100μl。
2.一次性微量移液器使用的吸头。
3.蒸馏水或去离子水。
4.洗板用的洗瓶或洗板机。
5.温箱或微量反应板用的封条。
6.酶标仪。
注意事项
1.要认真阅读操作说明,按操作说明进行操作。
2.试剂盒及试剂盒中的所有试剂要保存在2~7℃。
3.没有用过的微量反应板必须密封于塑料袋中并保存在2~7℃。
4.不同批次的试剂或说明书不可混合使用。
5.使用处理各个试剂时要小心,严防细菌和真菌对试剂的污染。
6.禁止使用过期的试剂。
7.在处理样本和试剂盒中的试剂时禁止吃食物、喝水和吸烟等。
8.各个样本使用不同的吸头,以防污染。
9.每次检测都要加阳性对照和阴性对照。
10.稀释各种试剂组分时只能使用超纯水。
11.底物溶液对眼睛、皮肤以及呼吸系统都有刺激作用,在使用过程中要防止该溶液接触眼睛和皮肤。
12.终止液中含有强酸HCl,容易引发烧伤,处理该溶液时一定要小心谨慎。
13.用吸量管吸取液体时禁止用嘴。
14.该试剂盒仅用于体外检测。
试剂准备
包被的微量反应板,样品稀释液,阳性对照,阴性对照,酶标二抗,底物溶液和终止液使用前无需处理。
洗涤液(10×)浓缩的洗涤液在使用前必须用超纯水进行10倍稀释。被稀释了的洗涤液可以在4℃的条件下保存3天,或冰冻条件下保存一年。如:250ml的洗涤液需用25ml的浓缩洗涤液和225ml的超纯水充分混合配成而成。注意:如果浓缩液中含有结晶,在使用之前必须将它融化,应将该液温水浴30分钟以上。
样品准备
新鲜的、冷藏(4°C少于8天)的、冰冻的血清或血浆都可以用于检测。
操作步骤
1.在使用时,所有的试剂盒组分都必须恢复到室温18~25℃。使用前应将各组分放置于室温至少一小时。
2.分别将50μl样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。
3.分别将50μl的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中,注意不同对照的吸头要更换,以防污染。
4.分别将50μl的被检样品加入剩下的检测孔中,注意不同检样的吸头要分开,以防污染。
5.轻弹微量反应板或用振荡器振荡,将反应板中的溶液混匀。
6.将微量反应板用封条封闭或于湿箱中(18~25℃)孵育2小时,也可以将微量反应板用封条封闭或于湿箱中孵育过夜。
7.吸出反应孔中的液体,并用稀释好的洗涤液洗涤3次,注意每次洗涤时都要将洗涤液加满反应孔,弃去反应孔中的洗涤液并拍干反应板。也可以用洗板机洗涤3次,每个反应孔应加300μl左右的洗涤液。注意洗板时要小心,以免样本之间的交叉污染。
8.分别将100μl的抗-CSFV酶标二抗(即取即用)加入反应孔中,用封条封闭反应板并于室温下或湿箱中孵育30分钟。
9.洗板(见6)后,分别将100μl的底物溶液加入反应孔中,并于避光、室温条件下放置10分钟。加完第一孔后即可计时。
10.在每个反应孔中加入100μl的终止液终止反应。注意要按加酶标二抗的顺序加终止液。
11.在450nm处测定样本以及对照的吸光度值,也可用双波长(450nm和620nm)测定样本以及对照的吸光度值,空气调零。
12.计算样本和对照的平均吸光度值(见计算)。
计算方法
计算被检样本的平均值OD450(=ODTEST)、阳性对照的平均值(=ODPOS)、阴性对照的平均值(=ODNEG)。
根据以下公式计算被检样本和阳性对照的阻断率;(阳性对照阻断率以同样方法计算)
ODNEG-ODTEST
阻断率=————————×100%
ODNEG3
试验有效性
阴性对照的平均OD450应大于0.50。阳性对照的阻断率应大于50%。
结果判定
如果被检样本的阻断率大于或等于40%,该样本就可以被判为阳性(有CSFV抗体存在)。如果被检样本的阻断率小于或等于30%,该样本就可以被判为阴性(无抗CSFV抗体存在)。如果被检样本的阻断率在30~40%之间,就应在数日后再对该动物进行重测。
2. 一套兽用抗体检测设备多少钱
其实,目前多数用于检测抗体的方法都是酶联法,一般包括,试剂盒、一般试验器具、酶联检测洗板机(可省略),分光光度计,温箱,冰箱、振荡器。全部算起来高级一些也不过几万元,一般水平,一两万余元差不多。
3. 猪场中,什么是抗体监测和净化。该怎么做
抗体监测,是利用血清学方法,现在常用ELISA检测试剂盒,对猪场的不同群体、不同阶段的猪,进行每个季度1次的血清抗体常规监测,通过分析群体抗体滴度、群体离散度和群体转阳率,综合评价猪群整体免疫效果和稳定性,从而进行疫病预警和免疫等工作的调整。
净化,是通过一系列的方法(免疫、监测,封群、驯化、自繁自养、全进全出等生物安全措施方法),将猪场中存在的某种致病因子去除,达到猪场中不再有某种疫病的存在。
针对不同的猪场、不同的疫病,采用不同的监测和净化方案。
4. 目前猪场自建实验室使用的检测技术有哪些
猪场自建实验室一般可以用的检测方法如下:
1、用显微镜检查公猪精业火力
2、药敏试验(需要高高压菌器、恒温培养箱、超净工作台、冰箱以及各种培养基和平皿、接种棒等)
3、抗体检测技术(如1、伪狂犬乳胶凝集试验、2、金标卡试纸条检测猪瘟、蓝耳、圆环等抗体的试验、3、ELISA试验用于检测猪瘟抗体,蓝耳抗体等)
4、条件好,学历高的猪场可以开展PCR检测(聚合酶链式反应).检测各种动物疫病的病原
5、有些猪场还可以做细菌分离培养及鉴定工作。
6、部分猪场可以做自家苗,有制作自家苗的技术
其他的技术就不多见了
5. 一般食品出现问题,比如鱼里面含有孔雀石绿、猪身上有瘦肉精,这些都是通过什么检测出来的
目前,孔雀石绿的检测方法以理化检测法和免疫学检测法为主。其中理化检测法包括:薄层层析法、分光光度法、高压液相色谱法、液相色谱质谱联用法、气相色谱质谱联用法等。酶联免疫检测法
酶联免疫法(ELISA)的基本原理是将酶分子与抗体分子共价结合,结合产物不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。底物可在酶的作用下使其所含的供氢体由无色的还原型转变成有色的氧化型,出现颜色反应,颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈一定的比例,显色反应可通过酶标仪进行定量测定。ELISA方法是一种既特异又敏感的检测方法,可分为:间接竞争抑制法、抗体/抗原包被直接竞争法和夹心法。
而对于猪肉中的“瘦肉精”,检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和高效液相色谱一质谱联用法(HPLC-MS),这些都是比较传统的办法,由于这些方法对仪器设备、操作人员的要求较高,耗时较长,在检测过程中往往是作为确认检验方法。目前,实验室中最常用的是酶联免疫吸附法,它是运用抗原抗体反应的原理对猪肉中“瘦肉精”作出定量定性的分析,一般实验只需2~3小时,具有成本低、速度快、检测灵敏度高、仪器设备简单等优点。另外有一些快速检测方法。
6. 哪些设备可以检测猪病尤其是常见的猪病。
猪场的常见病主要是传染病和寄生虫病,尤以前者最为严重。因此,实验室检测的重点主要是猪传染病。猪传染病分为细菌性传染病和病毒性传染病,细菌性疾病的实验室检测方法主要有涂片镜检、分离培养、生化试验、动物试验、血清型鉴定及药敏试验等,属于传统的实验室检测方法,操作繁琐,需要的时间长。
病毒性疾病检测常用方法主要有 3 种 :
一是胶体金检测卡试纸条,如猪瘟、猪伪狂犬病、猪蓝耳病等,分为抗原检测卡和抗体检测卡,检测所需时间短,但其敏感性较低,且检测结果只能提供阳性、弱阳性、阴性的半定量结果,无法提供数值性的检测结果。因此,该方法目前只能作为初筛诊断试剂,用于疾病的辅助诊断。同时,也无法区分是疫苗抗体还是野毒抗体 ;
二是抗体(抗原)检测 ELISA试剂盒,目前,常用的猪瘟、猪伪狂犬病、猪蓝耳病、猪圆环病毒病、猪口蹄疫等,既有国产的,也有进口的,操作方便,检测结果快,但需要酶标仪,并且抗体ELISA 检测试剂盒,除猪伪狂犬病等少数试剂盒外,其他大多无法区分疫苗抗体和野毒抗体,往往需要根据抗体水平升高的幅度和抗体离散度、临床表现等来进行判断,并且有些国产试剂盒与进口试剂盒检测结果存在一定差异。
三是PCR 检测方法,科研院所、大专院校及部分畜牧局系统应用较多,检测结果准确,但需要配套仪器,如 PCR 基因扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统等,投入费用高,操作条件要求高,需要专业人士才能操作。
其他,如血凝试验、中和试验、凝集试验及琼脂扩散试验等,要么操作复杂、技术要求高,需要昂贵仪器,需要一定条件的实验室才能开展,要么特异性较低,也不适合大批量样品的检测。
7. 猪病检测hc ab是什么意思
HC 表示猪瘟,ab表示抗体
检测HC-ab 就是检测猪瘟抗体,也就是检查猪是否感染猪瘟病毒或注射过猪瘟疫苗。