⑴ 请教流式细胞仪的选购 BD FACS Calibur的分选效果如何
这款仪器非常老旧了。国际上也早就淘汰了。BD在除了中国的市场也已经快要停止对这款仪器的技术支持。作为分析用还凑合,分选的效果很差,很慢,效率低。技术非常古老了。
分选推荐BD Aria III或者Fusion
⑵ 关于BD流式细胞仪的问题,流式细胞仪双激光八色与三激光八色有何区别
不管哪家的流式,每种激光都可以配置一定数量的检测通道(也就是对应的颜色数量)。同样是八色,配置了三个激光的肯定是明显优于两个激光的。两个激光配八色通道,已经是两个激光的极限了,没有进一步升级的可能,而且所选的颜色限制很大,实际并不能同时检测8色。而三色激光,配置8个通道,还有升级的空间,被检颜色的选择范围也要大的多。
⑶ 生名科学实验室常用仪器有哪些
拜托,标题别写错别字,改改。
1、样品保存:
冰箱/超低温冰箱(thermo,sanyo)
液氮罐(thermolyne,sanyo)
2、样品前处理:
移液器(gilson,ependof,biocos)
天平(梅特勒,赛多利斯)
均质/搅拌系列(IKA,KINEMATICA,LABSCAN)
离心机(sigma,日立,ebendof,hettich,beckman)
冻干机(telstar,sanyo)
高压灭菌器(MMM,SANYO,STURDY)
电泳仪(bio-rad,epondorf)
3、培养过程
培养箱系列(sanyo,labscan,binder,mmm)
生物安全柜/超净工作台(telstar,baker,thermo)
发酵罐(infors,labconco)
摇床(IKA,INFORS,LAB-LINE)
水浴(LABSCAN,JULABO)
转瓶机(WHEATON,IBS)
PCR(thermo,epondorf,ABI,BIO-RAD,MJ)
酶标仪(bio-rad,thermo,epondorf,ABI)
4、观察分析
显微镜(olympus,leica,nikon)
菌落计数仪(INTERSCIENCE)
流式细胞仪(bd,日立)
DNA测序仪(ABI)
高效色谱系列(agilent,whatman,abi,dionex,mathon)
5、其它
洗瓶机(labconco,miele)
超纯水系列(MILLIPORE,ELGA,PALL)
超声波清洗(YAMATO)
等等,其它设备还有很多,要根据实验内容配置。
⑷ 你好,做人源一抗 流式抗体实验,用BD哪种型号流式细胞仪好
这么多抗体,但是只列了六个颜色。你是怎么计划的呢?
如果一次染六个。基本上现在常见的机器是都可以做的。比如Fortessa, LSRII 等等。
⑸ bd十色流式细胞仪都有什么型号
只要能配置3种以上激光的仪器都可以测10色。这个和型号的关系不大,除了某些型号只能配置2种激光外,其他机器都可以。但是要看买的时候是否都配齐了。
比如LSRII,可以配4种激光,可以检测14种颜色。但是如果买的时候只配了2个激光,型号还是LSRII,但是就不能检测10色了。
⑹ 在医院用于临床工作的流式细胞仪多是什么牌子什么型号的
一般是BD或者贝克曼的。
⑺ 美国BD公司生产的流式细胞仪哪一款型号比较全面,适合于普通医院检测诊断比较新的型号是哪一款
这个主要看你要做的检测指标了。不一定要可检测的颜色越多越好。
常见的LSR II, 可以装4个激光,14种颜色,完全可以满足一般的临床检测需求。
⑻ 如何选择适合的流式抗体(五):举例
举例一:BD流式仪器FACSCalibur试剂选择及常见问题解答
一、如何搭配流式抗体荧光标记
流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的:流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多,那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多
A、如何根据流式细胞仪搭配流式抗体
1)BD流式细胞仪(06版目录第614页)
流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的,所以首先需要注意两点:
流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光,能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色,而选配的Calibur(FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光,可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。
不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的,比如Calibur的FL3(第3通道)能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色,但是第4个通道检测荧光素是不一样的
搭配荧光素原则
搭配流式荧光素有2个原则:每个通道只能选择1种荧光素;各个通道之间的荧光素可以随意搭配,但需注意
1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明,Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488,或者选择了AlexaFluro488就不能选FITCCalibur的FL3通道尽管能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五个荧光素,但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配:如果客户的流式细胞仪能做4个通道,在第1个原则之下,那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例,Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。
比如常用的搭配是FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4),这个搭配组合可以更改成AlexFluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+AlexFluro(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等。总之,在第1原则之下,我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是,APC和PE-Cy5一起使用的话,上流式以后,容易导致补偿过度
B、BD公司抗体有多少种荧光素
1)供应商能提供的每种抗体的荧光素是不一样的我们需要根据同时结合供应商能提供的每种抗体的荧光素进行搭配。原则上同一个标志的不同的克隆号带同1个荧光素在应用上没有区别的,但是有些不同克隆号的抗体之间可能会有一些稍微的差异,需要仔细看说明书。我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体,或者选择荧光素种类最多的克隆号的抗体
2)荧光素
可以登陆www.bdbiosciences.com/spetra,输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光,就可以查到相应的波长。
为什么要推荐使用AlexFluro488和AlexFluro647呢?
因为这些荧光非常明亮,对激光非常稳定,适合流式细胞仪的光谱性质,对PH值不敏感,具有水溶性。此外,他们联合使用时发射光谱存在巨大差异,无需补偿。
C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道,怎么办?
如果需要做5个指标,而流式细胞仪只能做4个通道,首先将指标归成2类,再将样本分成2份,分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma,那么将样本分成两份,第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4,而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型对照(IsotypyControl)
1、为什么要用同型对照?
同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前,染色方式如下:
样本管:一抗+样本
同型对照管:同型对照+样本
2、如何选择同型对照?
一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体,比如抗人的CD56APC标记的抗体,货号是555518,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的MouseIgG1,κ,货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体,货号是555901,成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的MouseIgG1,κ,货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下:
样本管:纯化的CDw25+PE标记的抗MouseIgG1+样本
同型对照管:纯化的同型对照+PE标记的抗MouseIgG1+样本
如果没有找到适合的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,那么优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同--相同类别。比如,某种的抗体的来源是MouseIgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2а为同型对照。如果也没有找到MouseIgG2а,那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到MouseIgG2b,那么选者相同荧光标记的MouseIgG2作为同型对照。
3、如何查找同型对照?
同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中,抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面,非人类灵长类的抗体同型对照在NONHUMANPRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少,大部分抗体都是小鼠来源的,所以它的同型对照跟小鼠的一样,放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面(注意:人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的)。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如,比如抗人的CD56APC标记的抗体,货号是555518,在06版BD目录的169页,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中MouseImmunoglobulinIsotype表格中,第191页,APC标记的MouseIgG1,κ,货号是555751。
4、哪些客户需要使用同型对照?
A对流式不是非常熟悉的客户。
B做胞内流式客户,比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
C使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户,因为客户不熟悉不常见标志的表达情况,根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体,如多抗,非特异性结合非常多,使用同型对照可排除假阳性。
D对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。
5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高?
首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次,因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高,而跟其类似的抗原非常多,那么加入同型对照时,同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性,所以会造成这种现象,在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他阴性对照,如空白对照等。
三、补偿微球
流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好,会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮,而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握,同时,补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时,需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿,才可以得到比较好的数据和图片。那么,现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BDCompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本(往往用待测样本单标来进行补偿调节)的缺点。它本身不携带任何荧光,借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等,操作起来很简单,灵敏度高,一致性好,使补偿更轻松更准确,而且最难得的是它最适合于多色分析(如五色、六色、七色等)和复合荧光素(如PE-Cy7、APC-Cy7等),因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存,方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。
⑼ BD推出新型流式细胞仪怎么样,那里能了解生物方面的最新资讯
全球流式细胞仪巨头BD生物科学公司最近推出了BD FACSVerse�6�4流式细胞仪。这款流式细胞仪目前有4色、6色和8色配置,带有前向角散射和侧向角散射,支持最多10个参数。4色和6色系统可通过升级而扩展。该系统体积小巧,能够轻松安装在标准的实验室台面上。 BD FACSVerse的光学系统特有微型化的检测光学装置,以及整合在滤光片装置中的微处理器,让配置检测自动化。如果仪器配置与定义的实验参数不一致,仪器会发出警告,从而保证了结果的可靠性。 你可以到生物帮那里详细的了解一下,在那里就有这方面的介绍的,我知道那里的资讯,文档比较全面,应该会对你有帮助的。 你可以去参考一下啊 www.bio1000.com/zt/cell/33895.html 希望对你有帮助。 真空驱动的流体设备,独特的样品注射管(SIT)改善了系统可靠性和信号分辨率。除了标准的高、中和低流速,BD FACSVerse系统还包括了一个特殊的高灵敏度流体模式,用于检测模糊染色的颗粒。新的流体设计还允许你选择样品输入装置。你可从微量离心管(~500 μl)到大的锥形管(最多50 ml)中灵活选择。 有了全新的BD FACSuite软件系统,用户可让常规任务自动化,如仪器启动、设置、样品采集和数据分析,并以最少的点击完成其他工作。软件包的模块化结构让用户可执行多项任务,在系统采集数据的同时开展数据分析。BD FACSuite软件还能将分析和实验导出至其他BD FACSVerse系统,最大限度地降低了常常遇到的系统和用户差异。BD FACSVerse流式细胞仪有着内置的智能性,旨在减少失误,提高效率,让过程自动化,并尽量减少用户的交互。 为了支持广泛的应用,系统提供了一些预先定义的BD研究分析,如凋亡、细胞周期、细胞增殖和细胞因子检测,这些分析与BD的试剂盒匹配,能带来重复的结果。系统也支持用户自定义的实验开发。研究人员可将他们的实验转化成可重复使用的分析,包括相关设置、获取和分析表。他们还可以建立报告参数,以便减少用户和实验室之间的数据差异。 BD生物科学细胞分析部门的总裁James Glasscock称,他们将前沿的创新融入BD FACSVerse系统,但同时本着三个原则。第一,他们希望为研究人员提供单个系统,此系统能够精确重复地处理常规应用以及复杂的多色实验。第二,他们试图简化流程,让系统更为易用。第三,他们为用户提供了升级路径,可从6个参数升级到10个参数,以及多个可选性能,以便满足未来的研究需求。
⑽ 我想了解一下流式细胞仪有那几个品牌谢谢!
BD 和BECKMANCOULTER,这两个是国内市场占有率最高的,还有德国的PARTEC和密理博的流式细胞仪,BD和BECKMANCOULTER的是最好的了。