跑蛋白胶的仪器是什么

A. 生物实验中的“跑胶”是什么意思

琼脂糖凝胶制作胶板从而让样品在胶板上产生电泳，简称“跑胶”。

分子生物学中的跑胶会出现条带，是因为带电荷的生物大分子在电泳池里的运动速度决定于该分子的分子量，所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成条带，进而实现了分离纯化生物大分子的目的。

(1)跑蛋白胶的仪器是什么扩展阅读

所需要的仪器：

1、电泳槽：电泳槽是电泳系统的核心部分，根据电泳的原理，电泳支持物都是放在两个缓冲液之间，电场通过电泳支持物连接两个缓冲液，不同电泳采用不同的电泳槽。

2、电源：要使荷电的生物大分子在电场中泳动，必须加电场，且电泳的分辨率和电泳速度与电泳时的电参数密切相关。不同的电泳技术需要不同的电压，电流和功率范围。

参考资料

网络-电泳

网络-琼脂糖凝胶电泳

B. 用跑蛋白的装置跑DNA聚丙烯凝胶可以吗

他那个本身就是聚丙烯酰胺凝胶的。可以。
梳子可以用齿数更多一些的，因为DNA的话不用那么大量的上扬，3-10ul都可以了
电压用10v/cm应该可以。染色采用银染法，这样灵敏度比较好，也可以用eb显色。

C. western protein中跑胶是什么意思

要做western，第一个步骤就是用聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）来分离蛋白，这个过程就是跑胶。因为蛋白是混合物，通过凝胶电泳（跑胶）以后，可以把不同分子量大小的蛋白分开，分子量大的蛋白涌动的慢，分子量小的泳动得快，就在胶上显出条带。然后再把胶上分离开的蛋白再转移到膜上，才能进行抗体后续杂交等工作，检测有没有目标的蛋白条带。如果不进行电泳分离，蛋白都混在一起，就没法知道是不是含有目标蛋白了。

D. western blot 显影使用ECL法，可以使用一般的凝胶成像仪吗，就是做核酸电泳用的那种仪器

这个和有什么光关系不大，是否能够拍摄到ECL的图像主要取决于设备是不是带有冷CCD。只有制冷的CCD才够灵敏度捕捉到膜上发出的光。
普通用于拍摄核酸和蛋白胶的相机就是普通CCD，天能2500就是普通的凝胶成像，ECL那么弱的光，一点都拍不到的。
要么找更高端的机器，要么就只能用胶片曝光了，否则无法观察ECL的条带。
你试试找找伯乐，Alpha什么的有高端成像仪的实验室，或者就找有暗室的实验室。

E. 红光胶原蛋白机是什么

红光胶原蛋白机是最新研制的一种帮助身体补充胶原蛋白的日光浴机。通过胶原蛋白光谱促进肌肤中胶原蛋白结构的重建。使用一次胶原蛋白机相当于做3、4次面膜的功效。
灯管采用可见红光中频率为610-650纳米的光波，改善皮肤的血液系统和淋巴系统的微循环，加速新陈代谢并刺激血液循环，令肌肤红润有光彩。并将光能转化为细胞能，刺激纤维细胞产生胶原蛋白和弹性蛋白，恢复皮肤弹性及质感，从根本上改善皮肤健康状态，令肌肤紧致平滑有光泽。并大大提高皮肤对保养品的吸收能力。长期使用会使肌肤颜色和结构组织得到明显的改善，从而减少皱纹，收缩毛孔，使肌肤看上去更紧致丰润。

F. 迪申蛋白预制胶，跑蛋白胶就是轻松!!!

上海迪申的可以！11

G. Western blot实验需要准备什么试剂和耗材

1.1细胞

①将细胞培养皿置于冰上，用冰冷得PBS洗涤细胞2次

②吸出PBS，加入裂解液（碧云天P0013；1%TritonX-100；）

a.融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

b.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。（一般10*7个细胞用100ul裂解后获得的上清蛋白浓度约为2-4mg/ml）

③用刮刀刮下贴壁细胞，转移至EP管，14000rpm离心5分钟

④将上清液转移至EP管，负20℃保存

1.2组织

①将组织样品剪成细小碎片（最好在冰上进行）

②加入裂解液

a.融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

c.按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

d.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果组织样品本身细小，可适当剪切后直接加入裂解液，通过强烈涡旋使样品裂解充分

（每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同）

③充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清

2. 蛋白定量（Thermo UF289356)

2.1稀释白蛋白(BSA)标准液的制备

2.2 制备BCA工作液（A液：B液=50：1 密闭室温可以保存一段时间）

总体积=（#标准孔+#未知孔）*#复孔*每个样本的体积

测试管每管2ml;96孔板每孔200ul。

2.3 浓度测定

①将25ul标准液和样本设置复孔加入96孔板，按照样本：BCA工作液（1：8）加入200ul BCA工作液(如果样本有限就加10ul比例用1：20；推荐每个待测的样本做2-3个平行反应；根据样品的浓度，可提前稀释5-10倍)

②最好摇匀30秒，将96孔板在37℃孵育30min

③冷却至室温，酶标仪设置为562nm，在5分钟内测试完所有的样本。

④所有的样本减去空白对照在562nm处的吸光度，绘制标准曲线，确定样本的浓度

3. 蛋白电泳

3.1 变性以及还原蛋白

在蛋白样品中加入含SDS（保证样品中的所有蛋白带电荷一致）的上样缓冲液，100℃加热煮沸。

3.1.1室温溶解蛋白上样缓冲液（5×），按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合。

3.1.2 100℃或沸水浴加热10分钟，以充分变性蛋白

3.1.3 冰上骤冷，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔即可

3.1.4通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近则可以停止电泳

4. SDS-PAGE凝胶电泳

4.1 胶的选择与制备（根据目的蛋白的大小，选择合适的分离胶的浓度）

4.2 配胶（碧云天P0012AC）

洗干净玻璃板，装板加水验漏后，晾干装到制胶架上。根据配方配胶。

（配胶顺序：先配分离胶（下层胶），充分凝固后，再配浓缩胶（上层胶））

4.2.2 配制浓缩胶（上层胶）

4.2.3 组装制胶器

①将制备好的分离胶灌入制胶板内（缓慢不要有气泡），随后缓慢加入适量异丙醇压平分离胶。

②20-30分钟分离胶凝聚完成，倾斜板，倒掉异丙醇，吸水纸吸去残余液体，弃去上层压胶的水或醇。

③加入配好的浓缩胶灌入制胶板内，然后插上梳子，20-30分钟浓缩胶即可凝聚。

④缓慢取出梳子，上样。

4.2.4 上样及电泳

①蛋白冰上溶解，调整蛋白浓度，和等体积5×上样缓冲液混合，即为上样液。用纯水冲洗胶板，放入电泳槽

②两块板之间倒入电泳液，确认无漏液

③迅速拔出梳子，用枪轻轻吹孔使碎片冲出

④依次加入蛋白marker和蛋白样品，每孔加上样液20ug，留一孔加预染的marker.加满电泳缓冲液，盖上槽盖，接通电源，先用70V恒压电泳，约30min,当指示剂溴酚蓝进入分离胶后改用90V恒压电泳，当指示剂到达距凝胶下端约0.5cm处时关闭电源，取出胶板。（上样时间尽量短，避免样品扩散，但也不能过快避免样品溢出而造成相邻加样孔的交叉污染，未加样的孔中加入等量的样品缓冲液）

⑤调节电泳的电压和时间，传统胶是上层胶80V，30min;下层胶120V 90-120min.

(为了防止蛋白条带再凝胶上扩散，电泳后应尽快转膜)

5. 转膜

将蛋白凝胶中的蛋白，通过电流作用转移到转印膜上。由于蛋白凝胶本身易碎，蛋白条带容易子啊凝胶中扩散，而且抗体也不易于进入凝胶中与目的蛋白结合，所以需要在转印膜这样的固相载体上实现后续封闭、洗涤，显色等实验操作。

5.1 转膜

①将减好的PVDF膜用无水甲醇润湿30秒以上，然后用dd H2O漂洗2min,浸泡于转移缓冲液中5min后开始后续操作

②装配转膜三明治结构（在转移缓冲液中制备三明治可以避免气泡的产生）

黑面（负极）→海绵垫→3层滤纸→凝胶→转印膜→3层滤纸→海绵垫→红面（正极），每层之间不能有气泡。然后将三明治转移至电泳槽中，黑面对黑面。

H. 据说跑蛋白胶实验有毒性，对实验员身体有影响，是否属实

蛋白电泳所用的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体都是有毒性的，理论上说，配制成凝胶后形成的聚丙烯酰胺凝胶但是安全的，直接用手碰触也没有关系。
但是即使是交联好的凝胶也不能保证没有任何单体分子的存在，因此，还是要注意防护。
所以在配置凝胶储备液的时候要戴手套，最好也戴口罩，在制胶时也应有手套保护防止皮肤接触。工作台及时清理，在实验室穿着实验服也是必要的。

大量的动物试验研究表明丙烯酰胺主要引起神经毒性；此外，为生殖、发育毒性。神经毒性作用主要为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变；生殖毒性作用表现为雄性大鼠精子数目和活力下降及形态改变和生育能力下降。

甲叉双丙烯酰胺，是强烈的神经毒素，对末稍神经系统有很强的破坏性。如果长时间在高浓度的丙烯酰胺环境下工作，会有手指颤动等症状。

另外在配胶中使用的过硫酸铵也有一定毒性，对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性。吸入后引起、喉炎、气短和咳嗽等。眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤。口服引起腹痛、恶心和呕吐。长期皮肤接触可引起变应性皮炎。

TEMED对粘膜和上呼吸道组织及皮肤有很大的破坏作用：强神经毒性。

I. 血红蛋白凝胶过滤层析所需仪器、用具、物品和实验的具体方案

一、实验目的

1.了解凝胶柱层析的原理及应用；

2.掌握凝胶柱层析的基本操作技术，为进一步掌握离子交换柱层析、亲和层析及吸附层析等其它分离方法打下良好的基础。

二、实验原理

凝胶层析：原理与应用

凝胶层析又称凝凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子无法进入凝胶颗粒中的静止相中，只能存在于凝胶颗粒之间的流动相中，因而以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此就要花费较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。

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凝胶过滤柱层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径一致，且呈珠状颗粒的物质。这种物质可以完全或部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外，而对某些小分子化合物则不能排阻，但可让其在筛孔中自由扩散、渗透。任何一种被分离的化合物被凝胶筛孔排阻的程度可用分配系数Kav（被分离化合物在内水和外水体积中的比例关系）表示。Kav值的大小与凝胶床的总体积（Vt）、外水体积（Vo）及分离物本身的洗脱体积（Ve）有关，即：

Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)

在限定的层析条件下，Vt和Vo都是恒定值，而Ve值却是随着分离物分子量的变化而变化的。分离物分子量大，Kav值小；反之，则Kav值增大。因此，在同一凝胶柱上分离分子量不同的物质时，由于流动相的作用，这些分离物质将发生排阻和扩散效应。若缓冲液连续地倾入柱中，柱中物质的排阻和扩散效应也将连续地发生，其最终结果是分子量大的物质先从柱中流出，分子量小的物质则后从柱中流出。流出物用部分收集器分管等量或等时地收集起来，检测后分段合并相同组分的各管流出物，即等于把分子量不同的物质相互分离开了。其分离效果受操作条件（如基质的颗粒大小、均匀度、筛孔直径和床体积的大小、洗脱液的流速以及样品的种类等）的影响，而最直接的影响是Kav值的差异性，Kav值差异性大，分离效果好；Kav值差异性小，则分离效果很差，或根本不能分开。

分配系数Kav既是判断分离效果的一个参数，又是测定蛋白质分子量的一个依据。从公式Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)可知，只要测出床体积Vt 和外水体积Vo 以及洗脱体积Ve，即可计算出Kav值。而凝胶床总体积Vt可用测量法得到：

由凝胶床的组成可知，床体积Vt等于外水体积Vo、内水体积Vi与凝胶颗粒实际占有体积Vg之和。即

Vt = Vo+Vi+Vg = Vo+Vi

而Vo和Vi可通过实验测得：当把分子量不同的混合溶液铺在凝胶床上时，其在内水体积和外水体积中的分布是不一样的。溶液中的分子大于凝胶孔径上限者不能进入凝胶网孔内，而被排阻在外水体积的溶液中。凝胶床的洗脱体积Ve刚好等于外水体积。即Ve=Vo (Kav=0)。然而，溶液中的分子小于凝胶孔径下限者能自由进入凝胶网孔内，凝胶床的洗脱体积Ve应等于凝胶床总体积，即Ve= Vt= Vo+Vi (Kav=1)。而溶液中的分子大小介于凝胶孔径上限和下限之间者，则能进入部分凝胶网孔中，故其洗脱体积Ve是在Vo和Vt之间（Kav在0－1之间）。

以床体积Vt（等于pr2h）和测得值Vo来计算分配系数的值为Kav，若以床体积Vt（等于Vo+Vi）和测得值Vo来计算分配系数的值为Kd。在同一层析条件下，对同一物质计算出来的Kav和Kd值尽管有一定的差异性，但都是有效的。只因Kav计算方便，所以目前多使用Kav。分离物在凝胶过滤层析时的行为，除用Kav和Kd表示外，还可用Ve/Vo或Vo/Ve（R值）表示。

反应原理

凝胶过滤不仅常用做物质的分离，还可以根据需要用某种试剂非常方便地处理某种物质，当该物质流经试剂区时，因为可连续接触新鲜试剂，因而可以充分发生反应，最后经过洗脱，再与过量的试剂分开。本实验就是通过凝胶过滤，用还原剂FeSO4处理血红蛋白。即首先在层析柱中加入含有还原剂的溶液，使形成一个还原区带，当血红蛋白样品（血红蛋白与铁氰化钾的混合液）流经还原区带时，褐色的高铁血红蛋白立即生成紫色的还原型血红蛋白，随着还原型血红蛋白继续下移，与缓冲液中的氧分子结合又形成了鲜红的血红蛋白。铁氰化钾则因分子量小，在层析柱中呈现其本来的黄色带而远远地落在血红蛋白的后边。本实验操作简便，直观性强，趣味性浓，通过肉眼观察即可检验分离效果。

三、实验材料

1.器材：层析柱，?10×200

2.试剂：

(1) 20mM磷酸二氢钠

(2) 20mM磷酸氢二钠

(3) 40mM FeSO4(用时现配)

(4) 0.2M Na2HPO4，80mM Na2H2EDTA

(5) 抗凝血（哺乳动物血样，以1：X的比例加入%柠檬酸钠，置于4℃冰箱中保存。贮存期以不超过3个月为宜）

(6) Sephadex G-25

(7) 固体铁氰化钾

四、仪器设备

铁架台、恒流泵

五、实验步骤

1．凝胶的处理 取3克葡聚糖凝胶（Sephadex-25）干粉，浸泡于蒸馏水中充分溶胀（室温，6小时），然后倾斜法除去表面悬浮的小颗粒，最后加入等体积pH7磷酸缓冲液继续浸泡（磷酸缓冲液用试剂1、2以39:51的比例混合，并用pH计校对）。

2．装柱 将层析柱下端的止水螺丝旋紧，向柱中加入约5-7cm高的缓冲液，把溶胀好的糊状凝胶边搅拌边到入柱中，同时开启止水螺丝，控制一定的流速，使柱中的凝胶一直处在溶液中。最好一次连续装完，若分次装入，需用玻璃棒轻轻搅动柱床上层凝胶，以免出现界面。装柱长度至少8cm。最后放入略小于层析柱内径的滤纸片，以防将来加样时凝胶被冲起。

3．平衡 用磷酸缓冲液洗脱，平衡20分钟。注意液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。

4．血红蛋白样品的制备 取1ml抗凝血于烧杯中，加入10ml pH7 20mM磷酸缓冲液，再加入固体铁氰化钾，使浓度达到5mg/ml。

5．层析柱还原层的形成 取1ml 40mMFeSO4于小烧杯中，加入1ml 0.2M Na2HPO4,80mM Na2H2EDTA混合液搅拌均匀。待层析柱上缓冲液几乎全部进入凝胶时，速取该混合液0.4ml加入层析柱中，待混合液完全进入柱床后加入0.7ml缓冲液。（注意还原剂的混合液要新鲜配制，尽可能缩短在空气中暴露的时间）。

6．上样 将柱中多余的液体从底部流出后关闭止水螺丝,取前面制备好的血红蛋白样品0.5ml，将样品溶液小心加到凝胶柱上，打开止水螺丝，使样品溶液流入柱内。

7．洗脱 用缓冲液进行洗脱，控制缓冲液在约每5秒一滴的流速，观察并记录实验现象。

8．清洗 待所有色带流出层析柱后，加快流速，继续清洗层析柱5min