1. 测定蛋白质的构型和功能要用什么仪器,有哪些步骤
你好,很高兴回答你的问题。
构型这个概念是指 一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不会改变的。构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。蛋白质的构型就是一级结构,指其氨基酸排列顺序。
测定蛋白质的构型的主要有两种方法:Edman降解(Edman degradation)和质谱法。
EDMAN降解法测序是经典的方法,通过从多肽链游离的N末端(或者C末端,但是很少)测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基,现在一般都是自动测序仪。
质谱法测蛋白只要是利用生物质谱仪,比如ESI-Q-TOF,ESI-IT-Obitraq。利用特异的酶将蛋白切成肽段, 然后通过质谱方法进行测定,产生数据或通过重头比对,或者通过生物信息学中数据库搜索的方法推断出肽段序列,然后再由肽段序列拼接处蛋白序列。这种方法是近些年来随着蛋白质组学的发展而广泛被使用,但是对于蛋白完整序列测定需要较强的生物信息学技术。
整体而言, EDMAN降解法准确, 但是耗时长, 而且对于所测定的肽段要求很高, 不能太长, 不能太难修饰等等, 一般能测个20-50碱基不错了。而质谱法方法快速,但是准确性比EDMAN降解法略差。
另外,楼主讲的蛋白功能测定,不同的蛋白质功能各异,蛋白功能主要通过生物学实验反复验证次得到,这个比较复杂,没有固定的模式,要逐一研究。
另外,像核磁仪可以用来研究蛋白的构象或者说晶体结构,表面等离子共振仪器可以用来研究蛋白蛋白相互作用,等等,蛋白质是未来有限的生物研究资源,现在全世界对蛋白质的研究热情都很高。也有许多相关的基础科教书,楼主感兴趣可以去看看。
纯手工打造,希望采纳哦。
2. 血液中激活蛋白用什么实验方法定量测定
血液中激活蛋白可以用双缩脲法来定量测定
血液中激活蛋白的肽键在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲。
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰,吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系,经与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。
所以血液中激活蛋白可以用双缩脲法来定量测定
3. 医院检验科都使用什么仪器或设备
医院检验科:血球分析仪、尿液分析仪、生化分析仪、血流变仪、发光仪、酶免内仪、糖化血红蛋白容仪、电解质分析仪、生物安全柜、离心机、显微镜、净水机、ups、高压灭菌锅、医用冰箱、温湿度计、计算机、打印机、空调等等。
4. 现在国内检测蛋白质用什么方法涉及到哪些化学仪器
目前食品中蛋白质的测定方法有蛋白质自动分析仪,近红外自动测定仪,紫外分光光度法以及凯氏定氮法等。本文采用纳氏试剂作为显色剂测定食品中蛋白质含量,适用范围广,可用于各类食品及保健食品的检测。用本法对标准品、质控样品进行测定获得满意结果,对批量样品的快速测定更具有实用性。现将结果报告如下。
材料与方法
仪器与试剂 WFZ800-D3型紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂)。分析纯硫酸、硫酸铜、硫酸钾。(1)纳氏试剂:称取碘化汞100g及碘化钾70g,溶于少量无氨蒸馏水中,将此溶液缓缓倾入己冷却的32%氢氧化钠溶液500ml中,并不停搅拌,再用蒸馏水稀释至1L,贮于棕色瓶中,用橡皮塞塞紧,避光保存。(2)硫酸铵标准储备溶液(1.0g/L):精确称取经硫酸干燥的硫酸铵0.4720g,加水溶解后移入100mL容量瓶中,并稀释至刻度,混均此液每毫升相当于1.0mgNH3-N(10℃下冰箱内储存稳定1年以上)。(3)硫酸铵标准使用溶液(0.01g/L):用移液管精密吸取1.0ml标准储备液(1.0g/L)于100ml容量瓶内,加水稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于10.0μg NH3-N。
方法
标准曲线绘制 取25ml比色管7支,分别准确吸取0.01g/L硫酸铵标准使用液0.00,0.5,1.0,3.0,5.0,7.0,10.0ml(相当于标准0.0,5.0,10.0,30.0,50.0,70.0,100.0μg),加水至10ml刻度,于标准系列管中各加2ml纳氏试剂,混匀后放置10min,移入1cm比色皿内,以零管为参比,于波长420mm处测量吸光度,以标准管含量为横坐标(μg),对应的吸光度(A)值为纵坐标绘制标准曲线。
样品测定 选择牛奶和奶粉为检测样品。精密称取样品0.1~2.0g置于250ml三角瓶中,加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml,先小火加热,待内容物全部炭化,泡沫停止后,加大火力至液体呈蓝色,使H2SO4剩余量约为3ml左右为止,室温放冷后,沿瓶壁慢慢加入10ml水,移入100ml容量瓶中,用少量蒸镏水洗三角瓶3次,洗液全部并入容量瓶中,冷却,加蒸馏水至刻度,混匀。测定时取0.5ml,加水至10ml刻度,以后操作同标准曲线。同时做空白试验。
计算公式
X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000
式中:X-试样中蛋白质含量(g/100g或g/100ml)
C-试样测定液中扣除空白后氮的含量(μg)
V1-试样消化液定容体积(ml)
V2-测定用消化液体积(ml)
m-样品质量(g)或体积(ml)
F-氮换算为蛋白质的系数。
蛋白质的氮含量一般为15%~17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.7,肉及肉制品为6.25,大豆为5.71。
结果
2.1 测定波长选择 含氮量为30μg的标准管在显色后,在波长400~440mm范围内每间隔5nm进行测定,最大吸收波长为420mm。
显色剂用量选择 含氮量为30μg的标准管分别加入不同量的纳氏试剂,在420mm的波长下分别测定其吸光度结果。纳氏试剂显色剂加入量为1.5~3.0ml时吸光度基本无变化,本法选择加入纳氏试剂2.0ml。
显色时间及稳定性 含氮量为30μg的标准管经显色后,分别在10,30min,1,2,4,8h进行测定。显色后10min~8h内吸光度稳定无变化。本法选显色10min后测定。
标准曲线 回归方程:y=0.016X-1.5×10-3,r=0.9998,最佳线性范围0.0~100μg。
精密度 牛乳和奶粉2种样品分别取6份按本法重复测定6次,牛乳和奶粉精密度测定结果:平均数分别为3.06,23.50;标准差分别为±0.029,±0.073;相对标准偏差分别为0.31%,0.94%。
对2种样品利用标准加入法作回收试验(表1) 结果可见,回收率为95.50%~99.44%。
2种方法测定结果比较 分别用GB/T5009.5-2003凯氏定氮法与本法测定。结果显示,2种分析方法的测定结果差异无统计学意义(t=0.026,P>0.05)。
测定标准物质 用本法测定4种不同的蛋白质标准物质,测定结果与标准物质含量一致。
以纳氏试剂作为显色剂快速测定食品中蛋白质的方法特点简单、快速,适用于批量样品测定。在碱性条件下NH3-N与纳氏试剂反应生成的黄色化合物稳定。本法与国标凯氏定氮法进行比较t=0.026,P<0.05,n=32,2种方法测定结果无明显差异。测定范围广,线性范围宽0.0~100.0μg;精密度高;相对标准偏差为0.31%~0.94%;回收率好,加标回标率为95.50%~99.44%。用本法测定标准物质结果一致,用于质量控制样本测定结果满意。本法仪器试剂简单,易于基层普及,有利于推广应用。
5. 常用的血清蛋白质含量测定方法有哪些
四种血清总蛋白质的测定的方法:
1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同,特别是白蛋白含色氨酸为0.2%,而γ-球蛋白中含量达2%-3%,导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2+,集中原法和双缩脲反应两者的作用,使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依赖于Cu2+.反应产物最佳吸收峰在650-750nm,方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右。有利于检测较微量的蛋白质。但试剂反应仍易受多种化合物的干扰。
2.紫外测定法 采用280nm和215/225紫外吸收值,计算蛋白质含量280nm 是由于蛋白质分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特异性和准确性受蛋白分子中该种氨基酸的含量比例影响甚大。尿酸和肝红素在280nm附近有干扰。紫外区200-225nm是肽健的强吸收峰。在此区域其吸收值为280nm的10-30倍,将血清稀释1000-2000倍可以消除干扰物质的影响。
3.采用沉淀反应进行散射比浊法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方,此方法甚为简便,不需特殊仪器,技术关键在于:①选择最佳试剂浓度及温度;②混匀技术;③选用的标准;④待测标本中的蛋白浓度。
4.染料结合法 蛋白质可与某些染料特异结合,如氨基黑(amino black)与考马亮蓝(comassive brilliant blue )。这一性质除了可以用于电泳后的蛋白质区带染色,亦可用于总蛋白质的定量。缺点是多种蛋白质与染料的结合力不一致。考马亮蓝在与蛋白质结合后的吸收峰从465nm移向595nm,这一性质可用分光光度法来定量检测。
6. 血细胞分析仪测定血红蛋白采用的是
血细胞分析仪测定血红蛋白采用的是(光电比色法)。
7. 我司测血神器——便携式血红蛋白仪的工作原理
便携式血红蛋白仪,分析仪采用光学反射光度法原理,利用测定试剂片的反射率来检测血红蛋白浓度。当配套试剂片按提示插入分析仪后,分析仪会自动检测空白,然后滴入一滴全血标本至测试孔,经扩散、反应后,该血红蛋白可在500-600nm 范围内有吸收光谱。分析仪的光学测定头会自动检测膜上反射光的变化,反射光的强度与血红蛋白浓度成反比,分析仪会在12秒内计算并显示血红蛋白的浓度。
8. 血液凝固分析仪检测原理有哪些
不同类型的血凝仪采用的原理也不同,目前主要采用的检测方法有:凝固法、底物显色法、免疫法、乳胶凝集法等。由于在血栓/止血检验中最常用的参数,均可用凝固法测量,故目前半自动血凝仪基本上以凝固法测量为主,在全自动血凝仪中,也一定包括凝固法测量方式。
凝固法(生物物理法)
凝固法是通过检测血浆在凝血激活剂作用下的一系列物理量 (光、电、机械运动等)的变化,再由计算机分析所得数据并将之换算成最终结果,所以也可将其称作生物物理法。
a.电流法
电流法利用纤维蛋白原无导电性而纤维蛋白具有导电性的特点,将待测样品作为电路的一部分,根据凝血过程中电路电流的变化来判断纤维蛋白的形成。但由于电流法的不可靠性及单一性,所以很快被更灵敏、更易扩展的光学法所淘汰。
b. 光学法(比浊法)
光学法血凝仪是根据凝固过程中浊度的变化来测定凝血功能。
根据待验样品在凝固过程中光的变化来确定检测终点的。当向样品中加入凝血激活剂后,随着样品中纤维蛋白凝块的形成过程,样品的光强度逐步增加,仪器把这种光学变化描绘成凝固曲线,当样品完全凝固以后,光的强度不再变化。通常是把凝固的起始点作为 0%,凝固终点作为100%,把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光的变化,将其转化为电信号,经过放大再被传送到监测器上进行处理,描出凝固曲线。
光学法凝血测试的优点在于灵敏度高、仪器结构简单、易于自动化 ; 缺点是样品的光学异常、测试杯的光洁度、加样中的气泡等都会成为测量的干扰因素。
c.磁珠法
早期的磁珠法是在检测杯中放入一粒磁珠,与杯外一根铁磁金属杆紧贴呈直线状,标本凝固后,由于纤维蛋白的形成,使磁珠移位而偏离金属杆,仪器据此检测出凝固终点,这类仪器也可称为平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光学法中样品本底干扰问题,但存在灵敏度低等缺点。
现代磁珠法出现在 20世纪80年代末,90年代初进入商品化。现代磁珠法被称为双磁路磁珠法。双磁路磁珠法的测试原理如下: 测试杯的两侧有一组驱动线圈,它们产生恒定的交变电磁场,使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动。凝血激活剂加入后,随着纤维蛋白的产生增多,血浆的粘稠度增加,小钢珠的运动振幅逐渐减弱,仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化,当运动幅度衰减到50%时确定凝固终点。
底物显色法(生物化学法)
底物显色法是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性的,该方法又可称为生物化学法。检测通道由一个卤素灯为检测光源,波长一般为 405nm。探测器与光源呈直线,与比色计相仿。
血凝仪使用产色底物检测血栓与止血指标的原理是 : 通过人工合成与天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列顺序、并还有特定作用位点的小肽,并将可水解产色的化学基因与作用位点的氨基酸相连。测定时由于凝血因子具有蛋白水解酶的活性,它不仅能作用于天然蛋白质肽链,也能作用于人工合成的肽链底物,从而释放出产色基因,使溶液呈色。产生颜色的深浅与凝血因子活性成比例关系,故可进行精确的定量。目前人工合成的多肽底物有几十种,而最常用的是对硝基苯胺(PNA),呈黄色,可用405mm波长进行测定。
免疫学方法
在免疫学方法中以纯化的被检物质为抗原,制备相应的抗体,然后用抗原抗体反应对被检物进行定性和定量测定。常用方法有 :
a.免疫扩散法。将被检物与相应抗体在一定介质中结合,测定其沉淀环大小,与标准进行比较,计算待测物浓度。此法操作简单,不需特殊设备,但耗时过长,灵敏度不高,仅适于含量较高凝血因子检测。
b.箭电泳。在一定电场中,凝胶支持物内的被检物与其相应抗体结合形成的一个个“火箭峰”,火箭峰的高度与其含量成正比,通过测定峰高并与标准比较进行定量测定。此法操作复杂,临床应用较少。
c.双向免疫电泳。 通过水平与垂直两个方向进行电泳可将某些分子结构异常的凝血因子进行分离。
d.酶联免疫吸附试验(ELISA法)。用酶标抗原或抗体和被检物进行抗原结合反应,经过洗涤除去未结合的抗原或抗体及标本中的干扰物质,留下固定在管壁的抗原抗体复合物,然后加入酶的底物和色原性物质,反应产生有色物质,用酶标仪进行测定,颜色深浅与被检物浓度呈比例关系。该法灵敏度高,特异强,目前已用于许多止血、血栓成分检测。
e.免疫比浊法。 将被检物与其相应抗体混合形成复合物,从而产生足够大的沉淀颗粒,通过透射比浊或散射比浊进行测定。此法操作简便,准确性好,便于自动化。
9. 都有哪些验血器材它们各用在什么样的验血类型中
1.血细胞分析仪:血细胞分析(血常规)
2.半自动/全自动生化分析仪:生化检验(如:肝功能、肾功能、血糖血脂...)
3.电解质分析仪:电解质检测:钾、钠、氯、钙
4.血凝仪:血凝项目:PT、APTT、TT、FBI...
5.酶标仪:免疫定性/半定量检测:乙肝两对半、丙肝抗体、HIV抗体...
6.化学发光分析仪:免疫定量:T3、T4、TSH、激素、肿瘤标志物等...
7.放射免疫分析仪:同上,因为有放射性废弃物,已逐渐被化学发光免疫分析仪取代。
8.血气分析仪:血气分析:氧分压、二氧化碳分压
9.血液椎板粘度仪:血流变:高、中、低全血/血浆粘度。
10.PH计:血液酸碱度:大部分血气分析仪也有此功能
11.血沉仪:用于血沉测定,比手工法多一项血沉方程系数
12.血糖仪:用于急诊末梢血糖检测
13.免疫比浊仪:用于免疫项目检测:ASO、RF、CRP、IG(G、D、E、M、A)、C3、C4...
15.电泳仪、分光光度扫描仪:用于:血清蛋白电泳、血红蛋白电泳、同功酶分析...
16.基因扩增仪、电泳仪、时间分辨荧光分析仪:分子生物学诊断:乙肝DNA检测、亲子鉴定等
17.原子吸收分光光度计:微量元素检测
...
其他厂用仪器设备:
显微镜:血细胞分析
离心机: 分离血清
水浴箱:模拟人体37度环境
培养箱:血液细菌培养、细胞培养
...
10. 伊鸿健康血液细胞分析仪是什么有什么用途
伊鸿健康血液细胞分析仪是什么?有什么用途?从这个仪器的名称就可以判断出这是一个医疗用的。血液分析仪器设备是做血液分析用途使用的。