1. 罗氏 lightcycler03 480实时荧光定量pcr仪的匹配的96孔板都有哪些
罗氏推荐他们专用的板子,其实只要外形一样的都可以用。
注意孔的大小和深度,还有边缘的高度就可以了。
2. 一般常见的PCR仪有哪几种类型
PCR仪分为:FLAT
PCR仪、梯度PCR仪、多通道荧光定量PCR仪、普通PCR仪,分类是五花八门的,主要还是看你需要,要了解详细找技术人员,如康高特
3. PCR实验室主要仪器设备和耗材清单
PCR实验室可分为样品制备、核酸扩散、产物分析3大区域,每个区域所用的设备不同,下面就给大家详细介绍一下PCR实验室每个区域都需要什么设备?
样品制备区:
生物安全柜 :防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散
样本低温冰箱:零下20摄氏度,-80℃ 保存样本及DNA
高速台式冷冻离心机:收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。 有些样品由于在常温下不太稳定,需要低温环境
水浴锅或者金属浴:用于DNA杂交过程中水浴控温
移液器:准确量取特定体积溶液
紫外灯或者消毒车:空间环境消毒
混匀仪:移取样本前需要混匀
超净工作台:涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成
低温摇床:用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养
磁力搅拌器:加速溶解固体内容物
核酸扩散区:
基因扩增仪:基因检测DNA/RNA扩增
荧光定量PCR仪:核酸定量分析
核酸提取仪:样品DNA/RNA提取
移液器:准确量取特定体积溶液
紫外灯或者消毒车:空间环境消毒
超净工作台:涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成
纯水装置:用于PCR,DNA测序需要超纯水
产物分析区:
电泳仪:水平电泳用于核酸DNA/RNA检测,垂直电泳用于蛋白检测,转印电泳用于将蛋白转移到膜上做weatern检测
凝胶成像系统/紫外检测仪:用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照;紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察,不能连接电脑
电炉:电泳琼脂凝胶加热融化
4. 荧光定量pcr仪 stepone plus的功率是多少
荧光定量pcr仪 stepone plus的功率主频1GHz。每一种品牌,每一种型号都不一样,而且客户选择的时候都不以功率为主,看中的是性能。
我这有几种荧光定量pcr仪 stepone plus的介绍
一、供应ABI StepOnePlus实时荧光定量PCR/荧光定量PCR仪
StepOnePlus实时荧光定量PCR
StepOnePlus™实时PCR扩增仪是全球实时定量PCR技术的领导者美国应用生物系统公司继Stepone荧光定量PCR仪之后,ABI公司最新推出的快速梯度联网实时荧光定量PCR系统
· 性价比极高的4色96孔系统,可以提供高精度的实时定量PCR结果
· 基于使用寿命长的LED光学系统,可以检测FAM/SYBR Green、VIC/JOE、ROX 和NED/TAMARA染料,用于进行基因表达分析、病原体定量测定、单核苷酸多态性(SNP)基因分型以及阴阳性分析等多种实验
· 可以进行标准模式和快速模式PCR反应,快速模式可以在40分钟内完成PCR反应,极其紧凑的仪器设计,适合任何大小的实验室环境
· LCD触摸屏和支持USB存储,系统配置更灵活,并且可以实现无PC操作
· 便捷的远程监控和电子邮件通知功能,可以节省宝贵的时间
· 具有独特的VeriFlex加热模块,可分为六个独立控制的Peltier加热块,极大地提高了系统梯度功能和温控的精度
2.美国应用生物系统公司StepOneTM实时PCR扩增仪
●高效益的Stepone 3色/48孔反应板或者Stepone Plus 4色96孔规格,提供精确的实时定量PCR结果
●LED光学系统可记录从FAM TM/SYBR® Green、VIC®/JOE TM和ROX TM染料发出的荧光信号,便于进行基因表达分析、病原体定量测定、单核苷酸多态性基因分型以及存在/不存在分析
●采用同一个加热块执行标准和快速PCR反应(不超过40分钟)
●直观、灵活的软件和向导,指导新用户轻松地完成实时PCR实验的三个简明易懂步骤
●超小型化设计的仪器箱架,适合任何实验室环境
●五种安装配置,适合不同实验室需要
●LCD触摸屏和USB驱动器,易于设置和分析
●便捷的远程监控和电子邮件通知功能,节能省宝贵时间
二、美国应用生物系统公司StepOneTM实时PCR扩增仪
美国应用生物系统公司StepOneTM实时PCR扩增仪采用用户易于使用的界面,是一种功能强大的实时PCR仪。得益于其高度灵活性和易用性,甚至连先前几乎无实时PCR经验的研究人员都完全有信心设置和操作SepOne扩增仪。此新型低通量扩增仪价格经济适中,适合于具有各种实验经验的人员使用。
从软件首页上开始,配合可选的操作向导,引导用户执行实验的各个步骤,包括样本和反应设置、热循环和荧光检测等。StepOne扩增仪甚至还可协助用户在线查询所需的实时PCR试剂。
荧光基团检测化学试剂包括基于FAMTM和VIC®染料标记的TaqMan®探针的分析试剂,提供卓越的特异性和灵敏度,便于进行实时定量检测、基因分型分析和多重反应分析
多种实时PCR应用
StepOneTM实时PCR扩增仪支持许多实时定量PCR应用,包括使用相对标准曲线和比较CT(ΔΔCT)进行相对定量测定以及使用标准曲线进行绝对定量测定的基因表达分析。此外,此扩增仪还允许对核酸进行定性、PCR扩增后检测,以进行等位基因鉴别(单核苷酸多态性基因分型)分析;及使用阳性内对照进行存在/还存在(阳性/阴性)分析。新应用包括作为独立应用的解链曲线分析,以及使用等位基因鉴别(单核甘酸多态性基因分型)应用的实时PCR扩增。
荧光检测
StepOne扩增仪中的所有样本反应孔均使用一种大功率蓝色LED照明。该LED可持续使用10年,减少了更换光源的需要。荧光发射通过电二极管上的滤光器进行检测。发射滤光器经优化可配合FAM TM/SYBR®GreenI、VIC/JOE TM和 ROX TM荧光染料使用。
软件
美国应用生物系统公司StepOne实时PCR扩增仪配备的软件在WindowsXp®操作系统上运行,并提供仪器控制、数据采集和数据分析等功能。软件采用用户易用的直观界面,包括下列功能:
*实验没计向导,帮助您设计和设置实验。
*移液方案和配方,用于快速设置实验。
*高级设置,适用于需要灵活性以便进行更复杂应用(如多重反应)的高级用户。
*快速启动设置,允许您扛即启动实验并于稍后反应板信息。
*实时监视扩增增长曲线,让您即时查看实验进程。
*远程实日寸监控,可从一台远程计算机监控实验进程。
*电子邮件通知,在实验已开始或结束时提醒您。
*自动基线和白动阈值功能令数据分析得以简化。
*自动单核苷酸多态性基因分型识别功能,具有直观的图表输出和量值分配特性。
*工具提示功能,当查看扩增曲线或单核苷酸多态性基因分型图谱时,易于识别样本反应孔。
*故障排除标记,帮助您诊断并解决实验中出现的问题。
*多图谱视图,可同时从四个透视图评估数据。
*简便的剪切和粘贴功能。
*方便地导出为PowerPoint®、Excel®格式或直接导出为jpeg文件。
表l已验证性能指标
动态范围 9个数量级的线性动态范围
灵敏度 可在单一报道基因TaqMan分析的30μL反应量中检测10份拷贝RNaseP模板
精密度 使用TaqMan®RNaseP仪器验证反应板,StepOne扩增仪可分辩5,000至
10,000个RNaseP模板拷贝(置信度99.7%)
运行时间 快速:使用TaqMan®RNaseP验证测试反应板,40循环PCR反应耗时不足40分钟;标准:40循环PCR反应耗时不足2小时
安装规格
发货前,每台StepOne扩增仪均已经过专业校准,以确保光学和热学精确度。在不足四小时安装期间,通过RNaseP仪器验证测试反应板会验证各项性能规格,以确保数据的高度精确性。
无需PC及可联网操作
StepOne扩增仪可采用五种不同配置进行安装:
1、本地协作配置(计算机控制)
2、独立运行配置(无需计算机)
3、联网配置
4、本地协作配置(局域网计算机控制)
5、扩增仪联网配合木地协作计算机配置(计算机控制)
连接至以太网能够实现远程监控及下载和上载试验文件与数据。
计算机规格
尽管StepOne扩增仪在无计算机的情况下也可执行操作(可从仪器触摸屏上通过快速启动功能启动实验运行),但StepOne扩增仪可能配备有膝上型电脑或立式计算机及USB记忆棒。
用户自行提供的计算机必须满足以下最低要求方可支持本扩增仪:
.WdindowsXP操作系统并已安装ServicePack2
.英特尔处理器,主频1GHz或更高
.最小内存容量512MB
.最小硬盘驱动器容量20GB
.CD-ROM光盘驱动器
.以太网接口适配器(网卡)(10BASE-T)
.最低分辩率达1024X1280的显示器
便捷的在线查询
为便于订购实时PCR扩增母液和塑料器皿耗材,可通过扩增仪软件中的Design Wizard(设计向导)访问实验材料清单,并直接链接到美国应用生物系统公司产品仓库(可选)。
服务与保修
购买StepOneTM实时PCR扩增仪包括—年期的免费保修(包括零件保修和维修工时)服务。
表2仪器规格
热循环系统 珀耳帜效应系统
加热块规格 48孔加热块
支持容量 10-30μL
支持耗材
·48孔 L (0.1ml)反应板与光学盖膜
·48孔 L (0.1 ml)反应板与光学平盖
·8连管 (0.1 ml)与光学平盖
·单管 (0.1 ml)与光学平盖
样本升降温速率 快速模式:+/– 2.2℃/秒 标准模式:+/–1.6℃/秒
加热块最高升降温速率 4.6℃/秒
温度范围 4℃/秒-100℃/秒
温度精确度 设定值/显示温度的土0.25℃(35℃至95℃)(时钟启动后3分钟 开始测量)
温度均一性 士0.50℃(时钟启动后30秒),温度范围35℃至95℃
解链曲线分辨率 低至0.1℃
光学系统 LED激发光源,发射滤光器、光电二极管
安装时已校正染料 FAMTM 、SYBR® Green 、VIC®、JOE®、ROX®染料
被动参照染料 ROX TM染料
数据采集 所有滤光器中收集中的所有反应孔数据(无论何种反应板设置)。试验结束后反应板设置可修改
定量PCR 快速:不超过40分钟
分析时间 标准:不超过2小时
触摸屏 LCD/6.5英寸FulI VGA(640X480)/260K色
5. PCR仪有哪些种类,如何选购
【PCR仪的种类】
分类总是五花八门,总体来说可以分为PCR扩增仪和实时荧光PCR仪两大类,有人也把它们称为半自动和全自动,或者定性和定量,都是比较不准确的称呼。
PCR最重要的就是个升降温过程,最初的水浴锅式PCR,就是三个水浴箱,一个机械臂,定时抓出反应槽转换水浴锅。这种东东体积大,迅速慢,但其实结果并不比以后的PCR仪差,我现在都很欣赏。后来有人利用致冷和加热做成了,固定位置升降温的PCR扩增仪。
后来随着定量技术的发展,有公司将扩增仪和检测做成一体,也就成了现在所谓的全自动(或定量)PCR仪。当然标准的叫实时荧光定量PCR仪。
【品牌】
什么东西都有品牌,现在国内国外PCR仪的品牌很多,就国外而言比较著名的有:
ABI美国应用生物公司:老牌的生物公司贵族,其收购了原来的PE,而PE公司是PCR的鼻祖,旗下有很多经典的PCR仪,有5700(已停产)、7700(已停产)、7000、7900等实时荧光定量PCR仪。
ROCHE罗氏诊断:炙手可热的新贵,LIGHTCYCLER是其唯一的PCR仪,市场做得很不错,以科研定位为主,但在国内很多医院使用,其很特色离心、气加热、毛细管等,设计另类,是最有特色的PCR仪,当然好坏另议,就单其另辟蹊径的技术能力和胆识就值的佩服。
MJ:刚入中国的名流,MJ的扩增仪在生命科研领域比较出名,其产品比较适合高通量检测,人类基因组计划用得很多。其实时荧光PCR仪刚进入中国不久,孔间能使用不同温度是其特色。这点其实比较有用。
伯乐:呵,廉价的麦当劳,ICYCLER是其主打,进入中国已经比较久了,产品和5700一样,是扩增仪上加装定量模块而成,特点是价格较低。
国内现在做的也很多,比如杭州博日、杭州朗基、上海枫岭、厦门安普利等。
【选购】
准确的讲包括实时荧光定量在内都没有自动加样和标本处理系统,只能算半自动的。PCR仪是个简单的东东,一个温控设备和一个检测设备而已。
关于温控,主要是介质问题。理想的介质是导热性好、比热大、接触紧密的东东。
这方面最好的是水浴和油浴,比热大(油比水更大)、溶剂化物体,与反应物无缝接触,效果当然最好。但是自动化,小型化难,只有最初的水浴锅式使用。
硅加热,这是使用最普遍的一种,优点:易自动化、速度快、直接加热降温,效果当然好,但是第一成本较高,第二其使用的介质是金属,导热虽然好,但是与反应管,很难做到无缝接触,定性时代可以加油,但用荧光定最,由于油有荧光信号不能用。所以在无缝接触上差一些。第三由于是底部加热,下部压力较大,有溢出的可能,不过新的仪器在加热盖以后解决了这个问题。
空气加热,用空气做介质有优点,与反应体系无缝接触,但是空气的导热性差、比热小的弱点明显。因此空气加热的要利用离心来产生空气流动,增强导热性,同时使用毛细管,加大接触面积、试剂微量化来弥补。这样做了以后效果还是不错。但有的厂商把什么离心、毛细管的好处大讲特讲,对气加热的弱点闭口不谈,却是高明的市场手法。同时,使用离心,对标本量增大是有影响的并且标本量越大,空气比热小的弱点就越明显,所以空所加热的仪器标本量都比较小。使用毛细管后由于反应液与管的接触面积增大,吸附现象更大,因此试剂的通用性差一般要专门开发,成本高,虽然试剂用量少,但因为是专用试剂,每人份就是以实际量算,并不省试剂。反而增加了毛细管成本。
关于功能,所有的PCR仪功能都大体相同。只有MJ孔间能使用不同温度比较独特,这对于多项目同时检测以及循环参数的调整比较有用。但其实时荧光的仪器刚进入中国不久,具体如何还不得而知。
关于选购,根据单位情况而定,由于PCR的技术含量其实并不高,好的国产仪器如杭州博日(与日本著名厂商大和有关)也差不太多。关于进口仪器,罗氏的仪器不错,但如果标本量大,建议不要用罗氏。一则会累死的。另外,每个标本要分摊的标准曲线、对照成本太高。同时,试剂也比较受限。
6. 进口实时荧光定量pcr仪牌子都有哪些
进口的有:ABI的,BIO-RAD的iQ5
Applied Biosystems公司的7700型实时荧光定量PCR仪是全球公认的荧光定量PCR的金标准
BIONEER:国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家,引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子
生物学
领域,目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较,很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96,产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热,5通道,16bit CCD检测,也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样,而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些,号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少
7. 荧光定量pcr仪有哪些品牌
进口的有:ABI的,BIO-RAD的iQ5
Applied Biosystems公司的7700型实时荧光定量PCR仪是全球公认的荧光定量PCR的金标准
BIONEER:国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家,引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域,目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较,很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96,产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热,5通道,16bit CCD检测,也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样,而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些,号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少,了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系北京力途科技有限公司进行试用,新公司都注重是售后服务,大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。
Stratagene:Stratagene现在为安捷伦公司的子公司,也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多,处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热,5通道,PMT检测器,但是没有梯度功能,用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙,噪音比较大,而且边缘的孔做实验的效果不太好,但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在,但是Stratagene的价格要实惠很多。
国产的:
西安天隆科技有限公司的TL988型实时荧光定量PCR仪
杭州博日的FQD-48A
8. 定量pcr仪48孔和96孔的选择,分别运用在实验项目中
1、普通PCR主要根据样品数来决定,如果同时做大量样本,选择96。而定量pcr,我觉得选择96的,因为定量通常样品很多;
2、好的定量pcr两者无差别;
3、有些带梯度的PCR要使用该功能对block有要求
9. 什么是实时荧光定量pcr仪
7900HT型荧光定量PCR仪的主要特点:
●高效平台-7900HT系统是为支持高通量而构建的, 光学系统经优化以适用于384孔板荧光信号的激活和实时检测。
●结果可靠-7900HT系统采用了与7700、5700相同的定量原理,利用Ct值(Ct定义为在基线上方产生可检测到的统计学上显著的荧光发射的这一PCR循环)和起始拷贝数的对应关系,通过外标准曲线精确计算未知样品的起始拷贝数。
●高度重现性-7900HT系统的荧光检测发生在PCR对数期的起始,因此反应管中各组分没有任何限制反应因素,从而确保检测结果都是精确并能重复的。
●先进的荧光检测技术-RISM® 7900HT荧光定量PCR系统在不降低速度、分辨率的情况下有效提高了产率,这是基于先进的荧光检测技术:一束激光扫描并激活384个孔的每一个孔里的荧光染料,荧光信号通过光栅分光,经过分离的多色荧光同时到达CCD摄像机,实现多色荧光同时检测。
●自动进样装置-7900HT系统配备有自动化配件可取得最高效率。自动化装置可容纳84块384孔板,机械手臂可按一定顺序将待测样品板运送至主机内,配备的条形码阅读器(Bar code reader)可自动识别进入主机的样品板编号,使你在任何时间可以在样品行列中插入或替代样品板。
●多样的化学试剂-7900HT型荧光定量PCR仪上可使用的化学试剂包括TaqMan荧光探针法和SYBR Green荧光染料法。TaqMan探针法具有高度的灵敏度和特异性,适用于实时定量的多重反应或单核苷酸多态性分析(SNP)。SYBRGreen染料应用于目标鉴定(筛选测定)或者在只需用少数几个反应的测定中最为理想。
●有效防污染-7900HT系统在PCR全过程中使用专门设计的和始终密闭的样品管。在加入样品和试剂后这些管子便立即封闭并在扩增和检测过程中保持这种状态,这样就可以大大地减少污染的机会;此外,7900HT系统不存在PCR后处理,有效防止扩增产物对实验环境的污染而造成的假阳性。
●多种定量方法-ABIPRISM® 7900HT序列检测系统软件为基因表达提供一种定量化方法。绝对定量是从一个标准曲线上直接测定目标(基因)的量。相对定量方法是通过与标定样品相比较而计算未知样品的量,不需要标准曲线。
1.绝对定量
为了测定未知样品中的目标(基因)的数量,7900HT系统可用来测定样品的CT,然后用一条标准曲线来测定起始的拷贝数。在标准曲线的绘制中,7900HT系统软件首先用已知的起始拷贝数的几种稀释度计算它们的CT值。接着,软件使用测得的CT值对应于起始拷贝数的对数值作图。至少在五个数量级范围中两者呈线性关系。
2.相对定量
对于基因表达研究来说,相对定量是理想的方法。这里不是应用标准曲线而是相对于标定样品计算表达水平。用一个内源对照来标定样品的量。这一方法与7900HT系统在一个多重反应中能同时对目标和内源对照进行定量测定的能力相结合,可实现高效、高通量的基因表达研究。
有效的SNP检测手段
除实时定量测定以外,7900HT系统包括对于已知的单一核苷酸多态性(SNPS)作大规模筛选的软件。在一对等位基因系统中,用对应于两个等位基因的两个TaqMan探针在同一个试管中做多重PCR反应。反应终止时所产生的荧光用7900HT系统进行测定,实验结果通过分析软件迅速取得。
仪器规格和技术指标:
· 系统组成
7900HT荧光定量PCR仪-384孔或96孔可更换式半导体控温PCR仪
488nm 长寿氩离子激光器
X,Y 双轴同步荧光扫描头
光栅和CCD检测装置
自动进样装置
DELL GX 270电脑
Windows 2000 操作系统
仪器控制, 数据采集及结果分析软件
Primer Express引物探针设计软件
最大产率
实时定量检测-5000样品/天(标准模式),96样品/35分钟(快速模式)
终点SNP分析-30000样品/2.5小时
·装机指标
以99.7%的置信度明确区分浓度差别两倍(5000和10000拷贝)的样品的定量结果
试剂和消耗品
完备的通用基本试剂盒和消耗品
十二万种Taqman Gene Expression Assays 人、大鼠、小鼠基因组基因表达分析试剂盒
二百万种Taqman Validated SNP Genotyping Assays 人、大鼠、小鼠基因组SNP检测试剂盒
Taqman 低密度表达谱芯片
Custom Assays 代客设计、合成引物探针服务
10. 请问用Taqman探针做RT-PCR用的实时定量PCR仪是什么型号的呢
你说的TL988是国产的天隆PCR仪器吧?那个仪器很烂的,千万不要买,建议买ABI7500,或者安捷伦的MXP3005,或者伯乐的,eppendorf的,都可以,基本上都是96孔4~5通道的。
现在36孔或者单通道的仪器已经没人用了,满足不了实验需求
通道是指荧光染料波长不同的通道,多通道可以同时检测多种波长不同的荧光基团,现在很多荧光PCR试剂都是双通道或者多通道的,你买了单通道的仪器做不了实验
另外,现在的仪器都是96孔了,你买个36或者48孔的仪器,通量太小了,样品多了一次都做不完