没有WB曝光仪器怎么看蛋白胶

① 文献中常有western blot和免疫沉淀结合在一起做的图，可是在下看不同，请帮忙看看这种图怎么看呀

图顶部的“+”和“-”分别代表是否表达载体蛋白以及载体蛋白的相关信息；

有什么不懂的还可以问我，谢谢！

② 请教下跑蛋白胶胶的浓度根据什么定的，我们实验室用的是8%-12%的胶，但具体怎么选不知道

这个要看你蛋白大小的，个人习惯：蛋白如果100kD以上的话用8%，100-60用10%，60-40用12%，40-10用15%，分子克隆上面有的，每个浓度大概跑什么大小的蛋白质。

③ 试分析如何进给你层析柱和凝胶而没有核酸蛋白检测仪和部分收集器也没有记录仪该怎么完成

去买个紫外灯照下试试看，一般的核酸蛋白对紫外线会有强吸收，核酸蛋白的峰会呈现黑色，你可以根据黑色带的移动，来判断分离情况。

④ 蛋白胶怎么看是否表达

对比空白对照，找空白里没有的条带

⑤ 做Western时如何判断蛋白是否降解

恩。。
如果蛋白样品比较多。。。
可以将电泳后的胶用考马斯亮蓝染色
观察染色后胶上的条带形状以判断蛋白降解情况。
如果蛋白样品比较稀少
也可以经电泳、转膜后将胶进行考马斯亮蓝染色
观察未转膜的其他分子量蛋白的条带分布情况作判断。

⑥ 关于小分子蛋白的Western-blot问题，实验时的胶浓度，电压，转膜条件等等

我最小也只做过十几KD的。但是根据原理呢主要有以下注意事项：

1。当然是胶的浓度。9kda的话要适当增大，15-20%应该差不多吧。如果实在不行还能考虑用gradient gel。

2。二是转膜缓冲液，内要含20%甲醇，新鲜配制，反复使用的话注意甲醇会蒸发掉。如果连续使用的话两三次应该还可以。甲醇一是能够洗掉跑胶时泡透了的SDS(SDS使蛋白带负电，方便移动)，二是帮助蛋白固定到膜上面。它同时有收缩胶的孔径的副作用，但对小分子无影响。
3。三是膜的孔径。很多常规的膜孔径为0.45um。你如果做小分子，17kd以下都跑掉了，那你应该试试0.2um孔径的膜。有一个小诀窍是转膜时叠两张膜一起转，如果小分子蛋白跑过了前面一张膜，那总还有可能被后面一张膜抓到。
4。四是转膜时间。小分子的话就不要过夜转，采取100V一小时应该就可以了，注意降温。

⑦ 做western blot时为什么转膜后膜上没有蛋白

只看marker也不可靠吧？还是用ponseau S （丽春红）给膜上的蛋白质显色看一下到底如何。 另外膜上没有marker的话，胶上还看得到marker吗？如果还在胶上，那么蛋白质可能也还在胶上，可以改变电流和时间重做一遍。 如果胶上膜上都没有

⑧ 怎么看蛋白质电泳分析结果图，以及它的原理是什么

双向电泳就是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合。
1.先进行等电聚焦电泳（按照蛋白等电点pI分离）：在胶中加入双性电解质溶液，加上电场后建立稳定PH梯度，蛋白质溶液加入后建立电场，蛋白以不同PI分离开来。
2.然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小）：将上一步的胶加上横向电场，同一PI中聚集的蛋白，由于分子量不同而分开。
经染色（一般是银染）得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。
二维电泳使用于蛋白组学研究，对大批量蛋白筛选鉴定中存在很大优势，通过不同胶做对比，把不同处的胶割出来单独鉴定。

⑨ 蛋白质电泳条带怎么看

蛋白质电泳条带怎么看
不能严格定量，只能互相比较。 无论什么染色法，条带亮度会随着染液多少及染色时间的不同而变化，无法严格定量。 page的作用更多的是看目的条带的大小，以及两个样品中相同蛋白互相比较多少。不能精确算出是多少ug或ng。
1.直接将带条带的凝胶放在 凝胶呈像系统 中进行定量分析.
2.将所需要的条带剪切下来,用X体积蒸馏水溶解,通过紫外分光光度计在280nm条件下,测定吸光度A值.根据仪器目前标准曲线计算蛋白质浓度,与蒸馏水体积X相乘,得到蛋白质质量.
3.如果样品中含有荧光成分,可以进行荧光分析.

⑩ wb实验蛋白需要跑出胶吗

需要，最多需要配4块胶,每块胶检测3-4种不同分子量的蛋白。