① 请教梯度PCR设置梯度问题
在三步法PCR中,变性温度通常设为94℃,也有98℃,温度和时间可以参考PCR酶的说明书;延伸温度通常设为72℃,时间根据酶的扩增效率和目的基因的长度来确定;这两个温度对PCR的影响不是关键的。但退火温度的改变会对PCR产生很大的影响,所以梯度PCR主要是针对退火温度而设计的。在同样的PCR反应体系下,设置的梯度温度为引物Tm值附近的温度范围,比较哪一个退火温度能扩增出目的条带。
反应管的放置由PCR仪的设置决定,我所使用的梯度PCR 仪是48孔的模块,一横排一个温度,最多可设8个不同退火温度,放反应管的地方里面的温度最高,外面温度最低;如果是96孔的模块,最多可设12个不同退火温度,具体你要看说明书对于仪器的详细说明。
② PTC200梯度PCR仪如何设置梯度
在添加步骤的时候有一个Option选项,选择就能看到了
③ Bio-RAD PTC-200 PCR仪如何具体设置梯度pcr
编写程序:
temp 设置温度和时间
ramp 调整变温速率
go to 设定循环的步骤
Gradient 设置梯度温度
在Step 3 中选择Gradient,下一个界面中Lower temp 输入你所设梯度的下限温度,Upper temp输入你所设梯度的上限温度,再输入时间
注意:你输入上限和下限温度后,仪器会自动平分为8个梯度温度。
④ eppendorf pcr仪的退火温度梯度怎么设置
设一个高的退火温度,设一个低的退火温度,然后会自动计算出中间每排孔的退火温度,你只要用最低和最高的那两个就够了.可以打EPPENDORF的技术支持电话问具体怎么操作.
⑤ 请问有谁知道如何使用Mx3005P(荧光定量PCR仪)设置梯度温度
博凌科为-为你解答:我用的也是Mx3005P,不能设置梯度温度,只能设置整体退火温度的梯度变化,463363484,欢迎交流
⑥ 普通PCR怎么跑梯度啊
是不同的管跑不同的温度呢?还是同一管跑梯度?如果不通的管子,就需要梯度pcr仪了,如果是一管,你可以设置在循环的时候,每循环一次温度递增或者递减0.5或者1度之内的。如果pcr连这个功能都没有,那你就多设几个循环,比如前10个循环50度,中间10个循环55度,后面10个循环60度,具体怎么设置根据自己的情况。
⑦ 谁能给我介绍一下这个PCR仪,可不可以用梯度PCR ,梯度PCR 的各个参数什么设置
这个型号做不了梯度,只能是一个温度的。如果你有其他型号的,直接上他们的官网去下载对应型号机器的说明书,有详细说怎么设定梯度PCR温度的步骤。http://www.biometra.com/thermocycler.0.html
⑧ 梯度PCR仪怎么设置温度循环我们用的是wealtec的SEDI G
威泰克pcr仪有中文界面的,可以先去setup里面把language调成简体中文,然后按照提示走就可以了。
PCR原理很简单,就是三个步骤的循环么,首先你要在纸上打一个草稿,设计好每个步骤什么温度,运行多久,然后几个循环。然后设置程序的时候,其实就是把你设计的步骤输进去就好了。
循环的概念也很简单,就是告诉系统,我想让这三个步骤运行多少遍的意思,SEDI里面内置的是GOTO函数,也就是说,当系统从左到右一步一步走,走到一个步骤如果遇到带GOTO函数了,系统就要停下来看一下,我下一步去哪?所以GOTO函数要告诉系统回到循环中的哪一步(举例,如果步骤1是95℃ 30s解链的步骤,然后步骤3是75℃延伸的步骤,那就在步骤3里面的GOTO函数设置回步骤1),但是你不能光告诉我回哪,你还得告诉我回几次吧?总不能每次到你这步都给我打回去,那不是永远跑不完了么??所以设置GOTO step1之后,还需要在最下面的框里,告诉我循环多少次,比如35次。
这样,在第36次系统运行到这个步骤的时候,这个步骤的GOTO函数就会把系统放行到下一个步骤了。至此,这套循环执行完毕。
提出这种问题的小朋友应该是没有编程经验,对基本的原理想不清楚。要是有点编程的经验,这个设置应该是很容易理解的。
⑨ 请问 新引物怎样设置梯度PCR啊
根据引物Tm值(Na+:50mM),两条引物有2个Tm值,一般建议低于较低Tm值的5~10℃,但实际上问题不是非常大,只要不是GC含量过高或过低的引物或非常难扩增的片段,Tm值不会影响太多。
另外,梯度PCR需要使用的PCR仪具有梯度功能,至于怎样设置,不同的PCR仪不一样,请参考对应的仪器说明书。