超声波破碎细胞缓冲液是什么

Ⅰ 超声波能破碎DNA吗

我现在做原核表达一个融合蛋白,其中单链抗体基因是合成的（根据大肠杆菌的密码子偏爱性设计的），表达载体是PET和pGEX，做了几次表达好象蛋白都行成包涵体。
我想请教的问题是：
一 如何判断是不是形成包涵体，我们实验室那个破超声波破碎仪坏了，再没有超声波破碎仪的情况下如何破碎菌体，我配了下面二种裂解液
裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100
裂解液：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml
再一起用我们那个破破碎仪超但根本打不动，最后我就用反复冻融法把其中二个在（37和-20反复冻融）感觉也不行，
请问大侠们，你们是如何破碎菌体的，反复冻融该怎么搞了？我看别人判断破碎是不是完全的标准是： 1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。
这一项是一个比较常用的方法，以前我的师姐也这么告诉我的，但我超一个小时还没有透明？
2，液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。
这一项跟没有看到粘滞性，是不是我破碎时加的液体太多了，大家在超声时加什么缓冲液？比例是多少？
3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。
高速离心检测时6,000 g是不是转速太低了，我们以前都20000g，离心后再跑胶检测？
4，染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检
染色后看什么样的结果说明破碎完全了？
二 我在做原核表达时，表达载体是PET和pGEX，表达条件是：
诱导温度37度 [IPTG]=0.5mM 时间是3h
表达后检测是包涵体
怎么搞才能使蛋白形成可容性的蛋白？
下面的方法哪个更有效一些：
1 降低表达温度。（20-30度表达）
2 增加诱导时细菌密度。（OD大于1.0）
3 降低表达启动温度。（先将菌株冷至20度左右再诱导）
4 降低诱导剂的浓度。（如IPTG可小于0.1mM）
5 增加通气。（培养瓶中放入1/3左右的培养基，猛烈摇动，增加氧含量，抑制包涵体形成）
6 减少诱导时间。（2-4小时

大家能给推荐一些进口超声破碎仪的资料

Ⅱ 谁能说说用缓冲液，采用超声波破碎细胞的方法提取蛋白质的过程谢谢

所用样品放在冰盒中，因为超声破碎会发大量的热，如果温度过高会使蛋白变性，设置功率，超4秒，停8秒，看你量的决定超的循环数，一般100次足够了。
要提蛋白的话不能说是用什么过滤，而是离心。
不知道楼上说的超声15秒能破碎多少细胞，反正我看没戏。
离心的话8000rpm就可以 ，当然看你提什么蛋白了，如果某一种蛋白的话，还学要做电泳之类的才可以彻底分开。
千万不要听楼上的，尤其是第二步，如果你辛辛苦苦提的蛋白给煮沸了，那蛋白不就变形了吗？ 你的工作就都白做了。

Ⅲ 细胞破碎技术的破碎阻力

高压匀浆破碎法（homogenization）
高压匀浆器是常用的设备，它由可产生高压的正向排代泵（positive displacenemt pump）和排出阀（discharge valve）组成，排出阀具有狭窄的小孔，其大小可以调节。细胞浆液通过止逆阀进入泵体内，在高压下迫使其在排出阀的小孔中高速冲出，并射向撞击环上，由于突然减压和高速冲击，使细胞受到高的液相剪切力而破碎。在操作方式上，可以采用单次通过匀浆器或多次循环通过等方式，也可连续操作。为了控制温度的升高，可在进口处用干冰调节温度，使出口温度调节在20℃左右。在工业规模的细胞破碎中，对于酵母等难破碎的及浓度高或处于生长静止期的细胞，常采用多次循环的操作方法。
振荡珠击破碎法 (Skaking Bead)
将等体积的小量组织样品与高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋盖微量管中,再加入缓冲液与稳定成份到1.5ml的体积, 用6500RPM振荡机高速上下振动8秒,休息8秒,再振动8秒即可.此方法是目前最快且一次可处理最多样品的方法. 一台机器最多可以在一天处理2400支样品.对小量且多样的人很方便.
高速搅拌珠研磨破碎法（fine grinding）

研磨是常用的一种方法，它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝等研磨剂一起快速搅拌，使细胞获得破碎。在工业规模的破碎中，常采用高速珠磨机 。
超声波破碎法（ultrasonication）
超声波破碎法利用超声波振荡器发射的15-25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液。 超声波振荡器有不同的类型，常用的为电声型，它是由发生器和换能器组成，发生器能产生高频电流，换能器的作用是把电磁振荡转换成机械振动。超声波振荡器以可分为槽式和探头直接插入介质两种型式，一般破碎效果后者比前者好。 渗透压冲击破碎法（osmotic shock）
渗透压冲击是较温和的一种破碎方法，将细胞放在高渗透压的溶液中（如一定浓度的甘油或蔗糖溶液），由于渗透压的作用，细胞内水分便向外渗出，细胞发生收缩，当达到平衡后，将介质快速稀释，或将细胞转入水或缓冲液中，由于渗透压的突然变化，胞外的水迅速渗入胞内，引起细胞快速膨胀而破裂。
冻融破碎法（freezing and thawing）
将细胞放在低温下冷冻（约-15℃），然后在室温中融化，反复多次而达到破壁作用。由于冷冻，一方面能使细胞膜的疏水键结构破裂，从而增加细胞的亲水性能，另一方面胞内水结晶，形成冰晶粒，引起细胞膨胀而破裂。对于细胞壁较脆弱的菌体，可采用此法。
酶溶破碎法（enzyme lysis）
酶解是利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞，使细胞壁受到部分或完全破坏后，再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜，进一步增大胞内产物的通透性。溶菌酶（lysozyme)适用于革兰氏阴性菌细胞的分解，应用于革兰氏阳性菌时，需辅以EDTA使之更有效地作用于细胞壁。 真核细胞的细胞壁不同于原核细胞，需采用不同的酶。
化学破碎法（chemical treatment）
采用化学法处理可以溶解细胞或抽提胞内组分。常用酸、碱、表面活性剂和有机溶剂等化学试剂
去垢剂破碎法（detergents）
蛋白质复性利用包含体与细胞碎片的密度差，用离心法将包含体与细胞碎片和可溶性蛋白质分开，获得了干净的包含体，再对包含体溶解复性。这样首先就摆脱了大量的杂蛋白、核酸、热原、内毒素等杂质，使后面的分离纯化简单了。从这个角度上讲，包含体的形成对分离纯化亦有好处。

Ⅳ 超声波破碎的原理及方法

超声波细胞破碎仪的原理并不是太神秘、太复杂。简单说就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。超声波细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构，匀质、乳化、混合、脱气、崩解和分散、浸出和提取，加速反应等功能，故广泛应用于生物、医学、化学、制药、食品、化妆品、环保等实验室研究及企业生产。