『壹』 请问什么叫QPCR
QPCR 问:什么是QPCR?答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系?答:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获93年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势,因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快,成为分子生物学诊断的主流,至今仍处于学术和应用前沿:第一代产品:基因扩增热循环仪(DNA Thermal Cycler)+电泳仪+紫外分析仪+定性试剂,构成PCR定性检测。第二代产品:基因扩增热循环仪+荧光仪+终点定量试剂,构成PCR-DNA终点法定量检测(End-point quantitative PCR detection),又分为终点酶免定量( End-point ELISA-PCR)和终点荧光定量(End-point Fluor-PCR)两种。第三代产品:实时定量QPCR仪+实时荧光定量试剂,构成QPCR-DAN/RNA实时荧光定量检测。问:相比以前的方法,QPCR有哪些特点?答:QPCR至少有以下特点:所用仪器少,只用一台仪器。检测时间短,只须45分钟~1小时10分钟(试剂各异),而定性PCR须3~4小时,酶免终点定量须6~8小时,荧光终点定量须2~3小时。操作极其简单:前处理后,样本插入仪器一小时后到电脑上来出报告即可,无须开盖,移样本(以前方法),避免污染。结果精确:定性PCR只能定性,很粗略,终点定量PCR由于只能在40个热循环结束后检测荧光,被测荧光达到饱和导致定量不够精确,属于半定量状态。而实时荧光QPCR是在扩增的每时每刻连续检测各样本的荧光值的变化,如图一所示: 图一 西安天隆TL988实际曲线1检测动态范围:10~10000000000 DNA copies/ml检测精度:0.1RLU辨别率:5000和10,000个模板拷贝样本的辨别率99.7%。问:QPCR的技术先进性、价格及应用现状?答:实时荧光QPCR是当今世界用于临床的最先进核酸分子诊断技术,被美国FDA承认并推崇,被美国FDA批准并取得临床应用执照的QPCR试剂品种有:HBV乙肝病毒DNA,HCV丙肝病毒RNA,HIV艾滋病病毒RNA,Chlamydi trachomatis(CT),性传播疾病,沙眼衣原体,Neiserria gonorrhea(NG),性传播疾病,淋病双球菌,Cytomegalovirus(CMV),性传播疾病,巨细胞病毒,Mybobacterium tuberculosis(Mtb),呼吸道疾病,结核分支杆菌等。实时荧光PCR仪研发技术难度大,门槛高,发达国家也只有有限几家知名公司生产,且售价昂贵:如美国ABI/7700-120万元,美国ABI/5700-50万元,瑞士Roche/Lightcycler-70万元,美国Stratagene公司2005年新品MX3005P-80万元 可见,在病人看来,哪家医院应用了QPCR技术便是先进诊断技术的象征,在发达国家也是如此。 国产仪器情况:国产仪器生产单位不超过五家,其中包括:日本独资杭州博日实时荧光QPCR仪(33孔)西安天隆科技有限公司TL988实时荧光QPCR仪(48孔) 以上产品均取得国家SFDA认证,报价均在45万以上。 国产试剂情况:多家公司生产实时荧光QPCR试剂盒,价格与终点法试剂相当,且品种齐全,价格便宜,购买方便:乙肝HBV-DNA,丙肝HCV-RNA,艾滋AIDSHIV-RNA,性病系列:淋病双球菌NG、沙眼衣原体CT、解脲支原体UU、疱疹病毒HSV、人体乳头瘤HPV,优生优育系列:巨细胞病毒CMV、弓形虫COX等。 编辑词条 开放分类:病毒、DNA、PCR、分子生物、实时荧光定量PCR仪 参考资料: 1. http://hi..com/pcr%D2%C7 2. http://www.medtl.com 贡献者:zhang120jing、弦之月NONO
『贰』 什么是qPCR引物
就是quantitative PCR(定量PCR) 引物
实时定量PCR可以用于DNA技术,RNA及蛋白质分析和诊断
『叁』 实时荧光定量pcr就是qpcr吗
实时荧光定量PCR(qPCR)用什么试剂盒比较好 加入荧光标记探针,巧妙地把核算扩增、杂回交、光谱分析和实时检测技答术结合在一起,借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据
『肆』 qPCR 4通道和 6 、8 通道有什么区别
楼主说的好像是qPCR机器能够读取的荧光频段啊。我本人只做过单色荧光的qPCR,对于多个目标专同时反应的qPCR只听说过属。
因为多个引物对,探针,同时在一锅粥里面,其交互作用及争夺酶和核苷酸等扩增资源,以及荧光跨频段干扰的情况非常复杂难以预测。
使用多通道的好处是快速产生大量数据,但是优化的过程很费时,一般只有在样本数量非常大(成百上千的样本),或者单个样本量非常少(几十ng的RNA)的情况下面使用。
通道数目就是你同时能够检测几种不同的目标序列扩增反应。请根据需要和能力选择。通道太多只影响仪器价格,不影响在单通道或较少通道情况下的使用。即是杀鸡用牛刀也。。。
『伍』 qPCR和qRT-PCR各有什么优缺点我该选择那个
QRT PCR一般指抄以RNA为模板,先逆转成cDNA,再进行qPCR
而qPCR一般是泛指,既可以当它是qRTPCR,也可以指他是专门定量检测DNA的
比如检测细菌的16S,那不需要做RT,直接用qPCR检测定量即可。
『陆』 什么是qPCR引物
就是quantitative PCR(定量PCR) 引物
实时定量PCR可以用于DNA技术,RNA及蛋白质分析和诊断
『柒』 qPCR 几通道 是什么意思 好像有4 6 8 通道
应该指的是real-time pcr仪的通道,双通道、四通道、六通道等等。
多通道指可同时检内测一个样品中的多种荧光,容仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品,通道越多,仪器适用范围越宽、性能就更强大。
『捌』 RT-PCR,QRT-PCR,real-timePCR之间什么区别
PCR:一种快速的DNA复制方法,由变性--退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成。
RT-PCR:反转录PCR(reverse transcription-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA(cDNA),再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物,使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。在扩增反映结束之后,可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行半定量分析,但分析的是PCR终产物,不能准确分析未经PCR信号放大之前的起始模板量。
real-time PCR:实时PCR(real-time PCR)属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。
Real-timePCR与reverse transcription PCR相结合,能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为定量RT-PCR(QRT-PCR)。

(8)qpcr是什么设备扩展阅读:
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
『玖』 请问实验室的常用技术PCR,qPCR,rtPCR,western blot 分别是为了什么目的进行的实验
pcr 常用就是扩基因,复提完rna后反转啊,那制你扩来基因用做什么就需要你来看了。
菌落PCR,也是扩,放大数目,好验证。
qPCR是荧光染料,做定量,一般是看表达,就是基因的表达情况,基因层面
rtPCR是半定量,相对上面的定量来说没有完全量化,相当于是质化,也能看出问题
western 是做蛋白的
『拾』 实时荧光定量pcr内参是什么东西
实时荧光定量pcr内参是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶内链式反应(PCR)循容环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

(10)qpcr是什么设备扩展阅读:
PCR原理:
1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。